시작하려면 보안경, 수술용 마스크, 비라텍스 장갑을 포함한 개인 보호 장비를 착용하십시오. 20 밀리리터의 마우스 신경 모세포종 또는 BHK-21 세포를 EGM에서 밀리리터당 10 내지 5 세포의 3.0 곱하기 농도로 준비합니다. 준비된 셀을 사용할 준비가 될 때까지 차갑게 유지하십시오.
다음으로 CVS-11 바이러스를 EGM에 희석하여 준비합니다. 준비된 바이러스는 사용할 때까지 차갑게 보관하십시오. 습도 슬라이드 챔버와 폴리테트라플루오로에틸렌 코팅 웰 현미경 슬라이드를 70% 에탄올로 청소하고 생물 안전 캐비닛에서 자연 건조시킵니다.
청소 후 슬라이드 챔버의 흡수성 종이 스트립에 증류수를 추가하여 절차 내내 일정한 습도를 유지합니다. 연필 라벨을 사용하여 각 슬라이드에 로트 번호, 날짜 및 셀 유형과 같은 필수 식별 정보를 표시합니다. 라벨이 부착된 슬라이드를 보관을 위해 슬라이드 챔버에 넣습니다.
그런 다음 반복 피펫을 사용하여 현미경 슬라이드의 웰에 50마이크로리터의 바이러스 희석액을 적용합니다. 50 마이크로리터의 세포 희석액을 각 웰에 바르고 웰에 이미 있는 바이러스로 피펫 팁을 오염시키지 않도록 주의하십시오. 그런 다음 습도 슬라이드 챔버를 닫고 섭씨 34도에서 36도 사이의 습한 인큐베이터에 넣습니다.
그런 다음 습도 챔버에서 슬라이드를 제거하고 상층액을 꼼꼼하게 흡인합니다. PBS로 채워진 코플린 항아리에서 슬라이드를 2분 동안 세척한 다음 자연 건조시킵니다. 슬라이드를 차가운 아세톤으로 채워진 코플린 항아리에 넣어 샘플을 고정합니다.
항아리를 가연성 물질에 대해 승인된 섭씨 영하 20도의 냉동고에 최소 1시간 동안 두십시오. 아세톤이 증발하고 슬라이드가 건조되면 광견병 직접 형광 항체 접합체를 슬라이드의 웰에 바르고 섭씨 34도에서 36도의 습한 인큐베이터에서 30분 동안 슬라이드를 배양합니다. 그런 다음 PBS의 코플린 병에 슬라이드를 각각 2분 동안 두 번 씻습니다.
슬라이드를 공기 건조시키고 0.05% 글리세롤 장착제에 0.15몰 트리스, 0.15몰 염화나트륨으로 커버 슬립을 장착합니다. 200배 배율의 형광 현미경을 사용하여 세포 감염도를 평가합니다. 그런 다음 인큐베이터와 습도 챔버에서 나머지 슬라이드를 제거합니다.
각 우물에서 상층액을 조심스럽게 흡입하십시오. 그런 다음 슬라이드를 PBS가 있는 코플린 병에 1-2분 동안 놓습니다. 슬라이드를 약 30분 동안 자연 건조시킨 다음 사용할 때까지 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.
