시작하려면 검사를 위해 환자의 혈청 또는 뇌척수액 샘플에 희석을 준비합니다. 필요한 접합체를 PBS에 0.05% Evans Blue로 희석하여 적절한 작업 농도로 준비합니다. 간접 형광 항체 검사의 경우 분석에 필요한 적절한 수의 준비된 항원 슬라이드를 검색합니다.
슬라이드를 해동하고 완전히 말리십시오. 그런 다음 슬라이드를 아세톤으로 채워진 코플린 병에 넣고 가연성 물질에 대해 승인된 섭씨 영하 20도의 냉동고로 2시간에서 밤새 옮깁니다. 그런 다음 아세톤에서 슬라이드를 제거하고 자연 건조시킵니다.
이제 슬라이드를 생물 안전 캐비닛 내부의 습도 챔버 상자에 넣습니다. 습도를 유지하려면 증류수에 적신 흡수성 스트립을 챔버에 추가하십시오. 각 대조군 샘플, 샘플 희석 또는 PBS의 50 마이크로리터를 미리 결정된 웰에 적용합니다.
밀폐된 습도 슬라이드 챔버를 섭씨 37도, 이산화탄소 5% 습도 인큐베이터에 30분 동안 둡니다. 완료되면 인큐베이터에서 습도 슬라이드 챔버를 제거하고 생물 안전 캐비닛으로 옮깁니다. 흡입기 팁을 사용하여 세포 단층을 방해하지 않고 각 웰에서 상층액을 조심스럽게 흡입합니다.
그런 다음 멸균 스포이드 피펫을 사용하여 각 웰에 PBS 한 방울을 도포합니다. PBS를 조심스럽게 흡입하고 각 슬라이드를 PBS로 채워진 Coplin 항아리에 옮깁니다. 그런 다음 슬라이드를 습도 챔버 상자에 다시 넣습니다.
적절한 항인간 항체 접합체 50마이크로리터를 각 웰에 적용하고 습한 인큐베이터에서 30분 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 습도 챔버를 생물 안전 캐비닛으로 옮깁니다. 흡입기 팁을 사용하여 상층액을 흡입합니다.
그런 다음 멸균 스포이드 피펫을 사용하여 각 웰에 PBS 한 방울을 도포합니다. PBS를 제거한 후 PBS의 코플린 병에 슬라이드를 총 15분 동안 두 번 세척합니다. 세척이 끝나면 슬라이드를 자연 건조시킨 다음 장착 매체로 커버 슬립을 장착합니다.
슬라이드를 가지고 형광 현미경으로 읽습니다. 형광이 없는 음성 샘플과 밝은 녹색 형광을 나타내는 4 플러스 샘플로 샘플을 음수에서 4 플러스로 등급화합니다. 희석 계수로 표시되는 샘플과 종말점 값을 할당하며, 샘플은 1-2 플러스 등급을 표시합니다.
초기 백신 접종 후, 환자 샘플에서 높은 수준의 면역글로불린 M과 G가 관찰되었습니다. 백신 접종 후 약 6개월이 지났을 때, 환자 샘플에서 두 항체 모두 현저히 낮은 수치가 나타났지만, 면역글로불린 M 수치는 거의 완전히 떨어졌습니다. 백신 접종 18개월 후 환자 샘플에서 면역글로불린 M 항체가 검출되지 않았습니다.
면역글로불린 G 수치는 2주 시점의 초기 감소 후 6개월 시점에 검출된 수치와 동일하게 유지되었습니다.
