마취된 마우스를 동물 홀더에 놓고 두 개의 벨크로 스트랩으로 고정하는 것으로 시작합니다. 컴퓨터를 켜고 소프트웨어를 열어 레이저를 활성화하십시오. 레이저가 쥐의 눈 중앙에 오도록 동물 홀더를 조정합니다.
얼굴 미리보기를 통해 후방 부분, 표재성 혈관신경총의 시야, B 스캔 및 시야 내 망막 단면을 시각화합니다. 가시광선 광간섭 단층촬영(optical coherence tomography) 또는 광학 초점을 약간 조정한 후 vis-OCT 부피를 획득합니다. 시야의 네 모서리 각각에 시신경 머리를 정렬하여 서로 다른 망막 영역을 덮습니다.
강도 기반 임계값 방법을 사용하여 망막 표면을 감지하고 부피에서 vis-OCT 섬유 그램을 생성합니다. 처음 16마이크로미터 깊이를 선택하여 망막 신경 섬유층(RNFL)을 자릅니다. 다음으로, 축 방향을 따라 평균 강도 투영을 계산하여 망막 신경절 세포 축삭 다발과 주변 혈관 구조로 구성된 섬유 그램 이미지를 생성합니다.
그래픽 편집기를 사용하여 혈관을 정렬하여 4개의 이미지를 후처리 상태로 몽타주합니다. 복합 vis-OCT fiber gram은 망막 신경절 축삭돌기에 대해 TUJ1 면역염색된 평판 장착 망막의 해당 컨포칼 이미지와 비교됩니다. 혈관은 공초점 이미지에서 ICAM II 표지된 혈관과 일치시킬 수 있는 구별 가능한 분지 구조를 나타냅니다.
생체 외 공초점 현미경과 in vivo vis-OCT를 나란히 비교한 결과, 동일한 망막 신경절 엑손 번들 네트워크와 주변 망막 혈관 구조가 밝혀졌습니다.
