야생 콩, S.Americanum 및 현지 품종의 호박의 씨앗을 수집하는 것으로 시작하십시오. 1 센티미터의 깊이에 질석에 씨앗을 뿌리고 완전히 물을주십시오. 약 70 %의 상대 습도에서 성장 챔버에서 재배하십시오.
섭씨 80도 냉동고에서 A.rhizogenes 균주 K599를 꺼내 섭씨 28도의 고체 LB 배지에서 48시간 동안 활성화합니다. 그런 다음 균주 K599의 단일 클론을 선택하고 LB 배지를 함유한 1밀리리터의 액체 항생제에서 12시간 동안 배양합니다. 500 마이크로 리터의 박테리아 현탁액을 LB 배지를 함유 한 고체 항생제에 골고루 뿌리고 섭씨 28도에서 24 시간 동안 배양합니다.
7 일 후, 묘목 자엽이 펼쳐지면 멸균 된 날카로운 메스를 사용하여 배축의 약 0.5-1 센티미터를 자릅니다. 기본 뿌리와 배축의 일부를 버리십시오. 배축 절개 부위를 K599 박테리아로 코팅합니다.
축축한 질석에 묘목을 심고 A.rhizogenes 매개 털이 많은 뿌리 변형을 사용하여 각 종의 30개 식물을 감염시킵니다. 그런 다음 5 밀리리터의 K599 박테리아 현탁액을 4 분의 1 강도의 Gamborg B5 기본 배지에 재현 탁하여 식물에 물을줍니다. 냄비를 투명한 비닐 봉지로 덮고 성장 챔버에 넣으십시오.
접종 후 약 12 일 동안 식물을 재배하십시오. 이때 절개 부위에 새로운 털이 많은 뿌리가 생성되어야 하며 일반적으로 길이가 2-5cm에 이릅니다. 540 나노 미터에서 녹색 여기 빛과 600 나노 미터에서 방출되는 CAMI 발광 이미징 시스템을 사용하여 리포터 유전자 DsRed2의 발현을 검출합니다.
야생 콩, S.Americanum 및 호박의 복합 식물의 뿌리가 자연 및 녹색 여기광 아래에서 시각화됩니다.
