마우스를 마취한 후 마우스의 한쪽 발을 부드럽게 꼬집어 마우스가 적절하게 마취되었는지 확인합니다. 1%tropicamide 점안액을 투여하여 쥐의 눈을 확장시키고 30초 동안 기다립니다. 그런 다음 눈의 움직임과 깜박임을 줄이기 위해 0.5%프로파라카인 염산염 방울을 양쪽 눈에 바른 다음 윤활제 아이 젤 방울을 바르고 마우스를 온수 패드에 놓습니다.
동일한 부피의 인도시아닌 그린(ICG)과 플루오레세인 염료를 포함하는 염료 혼합물을 준비합니다. 복강 내 주사를 통해 혼합물 250마이크로리터를 쥐의 뒷다리 근처 왼쪽 아래 사분면에 주입하고 장기 천공을 방지하기 위해 피부와 평행하게 위치시킵니다. 플런저를 조심스럽게 집어넣어 주사기 캡에 피가 들어가지 않도록 합니다.
일정한 속도로 염료를 서서히 주입하여 진행합니다. 그런 다음 이미징 플랫폼의 가열 패드에 마우스를 놓습니다. 카메라를 기준으로 마우스 몸체의 위치를 45도 각도로 조정하고 머리를 약간 아래쪽으로 부드럽게 기울입니다.
면봉을 사용하여 이미징할 눈을 섬세하게 닦아 윤활제 점안액이나 젤 층을 제거합니다. 카메라를 마우스 눈 쪽으로 전환하고 수집 모듈에서 FA 채널을 선택합니다. 시신경이 화면 중앙에 오도록 마우스의 머리를 배열하여 레이저 스캐닝 검안경을 기울일 필요가 없습니다.
이제 수집 모듈의 ICGA 채널로 전환하십시오. 눈이 이미징 소프트웨어의 전체 화면을 차지하면 이미지 감도를 조정하기 위해 획득 모듈의 둥근 검은색 버튼을 돌립니다. 검안경의 손잡이를 사용하여 초점을 미세 조정합니다.
그런 다음 수집 모듈의 둥근 검은색 버튼을 눌러 이미지를 정규화합니다. 정규화 후 터치스크린 패널의 ACQUIRE 버튼을 클릭하여 이미지를 저장합니다. 획득 모듈을 사용하여 FA 채널로 전환하고 앞서 설명한 대로 각 이미지의 감도와 초점을 모두 조정하여 맥락막 신생혈관 형성 또는 CNV 병변의 누출을 캡처합니다.
그런 다음 주입 후 3-4분 후에 ICGA 및 FA의 초기 단계에 대한 이미지를 캡처합니다. 필요한 모든 이미지가 캡처되면 젤 윤활제나 연고를 쥐의 눈에 바릅니다. 모세혈관 CNV는 어린 쥐의 CNV 병변을 지배합니다.
대조적으로, 늙은 쥐는 대구경 혈관, 혈관 루프 및 문합 연결을 특징으로 하는 동맥 CNV를 나타냅니다. 어린 마우스와 늙은 마우스 모두 어린 마우스의 ICGA 이미지 FA.In 망막 혈관 구조가 보이지 않고 맥락막 혈관이 희미하게 보입니다. 늙은 쥐의 ICGA 이미지에서는 맥락막 혈관이 희미하게 보이는 동안 부분적인 망막 혈관 구조를 관찰할 수 있습니다.
늙은 쥐의 동맥 CNV는 젊은 쥐의 모세관 CNV에 비해 더 큰 CNV 크기와 훨씬 더 많은 누출을 나타냅니다.
