먼저, 이전에 방출 칵테일과 함께 뇌내 주사를 맞은 마취된 쥐에게 진통제를 피하 투여합니다. 입체 프레임에 쥐를 장착하십시오. 이어 바를 사용하여 헤드를 고정하고 앞뒤로 회전 운동이 방해받지 않도록 합니다.
머리를 40도 각도로 아래쪽으로 고정하여 목 뒤쪽을 적절하게 확장합니다. 면도기를 사용하여 목털을 면도하고 멸균 면봉을 사용하여 10% 포비돈 요오드와 알코올을 번갈아 가며 3-5초 동안 다른 방향으로 문질러 피부를 소독합니다. 손가락 끝으로 후두부 돌기와 아틀라스의 척추 사이의 둥근 모양의 함몰 영역을 식별합니다.
마커를 사용하여 이 점을 표시합니다. 1밀리리터 주사기를 입체 프레임에 고정합니다. 바늘이 표시에서 피부에 닿도록 배치합니다.
집게를 사용하여 피부층을 통해 주사기를 삽입하면서 피부를 들어 올립니다. 플런저를 부드럽게 뒤로 당겨 주사기 내부에 음압을 생성합니다. 주사기에 뇌척수액이 보일 때까지 바늘을 서서히 삽입합니다.
이 위치에서 바늘을 안정적으로 잡고 뇌척수액이 천천히 흐르도록 합니다. 최대 120마이크로리터의 뇌척수액을 천천히 제거합니다. 주사기를 조심스럽게 회수합니다.
실험 동물의 체액 보충을 지원하기 위해 1ml의 정상 혈청을 복강 내로 투여합니다. 액체 생검을 400마이크로리터의 신경 줄기 세포 배지와 결합하고 나중에 사용할 수 있도록 마이크로 원심분리 튜브를 섭씨 4도에서 보관합니다. 그런 다음 동물을 수술 후 모니터링 구역으로 옮깁니다.
생검을 착유한 결과 평균 3.17개의 통과 가능성을 가진 신경 줄기 세포 배양이 이루어졌으며 심지어 9개의 통로에 도달했습니다. 수집된 세포는 Poly-D-Lysine으로 코팅된 웰에 도금되어 부착성 단층으로 성장하고 드물게는 신경구로 성장했습니다. GFAP 양성인 갓 분리된 세포는 정지 마커 ID3에 대해서도 면역 양성이었고 NSE 양극성 형태 특성을 가졌습니다.
생검 유래 세포와 사후 유래 세포의 면역세포화학적 비교는 수집된 세포의 프로파일이 내인성 뇌막하 영역 세포와 유사하다는 것을 보여주었습니다. 성장 인자는 SOX2 세포의 수반적이고 중요한 증가와 두 샘플 모두에서 이중 코르틴 양성 신경 아세포를 감소시켰습니다.
