겨자 진딧물의 수집, 유지 및 분자 식별

절제된 십자화과 잎과 바닥에 물이 침투한 여과지로 임시 유지 관리 페트리 접시를 준비하는 것으로 시작하십시오. 다음으로 준비된 페트리 접시에 진딧물 5 개를 놓습니다. 진딧물의 수가 늘어나면 원래 잘라낸 잎을 4-6개의 작은 조각으로 자릅니다.

진딧물과 함께 각 작은 잎 조각을 신선한 잎과 젖은 여과지가 들어있는 별도의 페트리 접시에 옮깁니다. 진딧물 게놈 DNA를 수집하려면 먼저 펠릿 유봉을 사용하여 진딧물을 균질화합니다. 그런 다음 제조업체의 지침에 따라 Gene-Spin 게놈 DNA 분리 키트를 사용하여 DNA를 추출합니다.

예열된 뉴클레아제가 없는 물 50마이크로리터로 게놈 DNA를 용출하여 추출 공정을 마칩니다. DNA 샘플을 프라이머 쌍이 있는 PCR 마스터 믹스에 추가하여 PCR 증폭 및 DNA 염기서열분석을 수행합니다. 겨자 진딧물의 정체를 확인하기 위해 1% 아가로스 겔 전기영동을 사용하여 PCR 산물을 분석합니다.

현장에서 채취한 진딧물은 PCR 앰플리콘 크기 및 Lipaphis erysimi CO1 염기서열 분석을 포함한 분자 마커를 사용하여 겨자 진딧물로 확인되었습니다.