곰팡이 라이브러리에서 EPF를 회수하려면 먼저 1/4 강도 SDA 플레이트에 곰팡이 분리물을 도포합니다. 분생포자 수확 전에 섭씨 25도의 어둠 속에서 10-14일 동안 배양합니다. 이어서, 0.03%Tween 80의 2-3 mL를 배양 플레이트에 피펫팅합니다.
그런 다음 접종 루프를 사용하여 분생포자를 긁어냅니다. 다음으로, 곰팡이 현탁액을 원심 분리기 튜브로 옮깁니다. 현탁액을 최고 속도로 세게 소용돌이친 다음 샘플을 혈구계에 피펫팅하여 분생포자의 수를 계산합니다.
원하는 농도가 얻어질 때까지 0.03%Tween 80을 사용하여 현탁액 내의 분생포자를 희석합니다. 접종 챔버를 준비하려면 먼저 바닥 페트리 접시를 틀이나 가위로 사용하여 직경 9cm의 잎 디스크를 자릅니다. 다음으로 전자레인지를 사용하여 각 접시에 대해 1.5%의 물 한천을 준비합니다.
냉각수 한천 30mL를 페트리 접시에 붓고 층류 후드에서 응고시킵니다. 한천 표면이 반고체일 때 잎 원반을 축면이 위를 향하도록 놓은 다음 약간 눌러 한천에 담그십시오. 이제 잎 디스크에 20 마리의 적성체를 놓습니다.
접종 챔버의 덮개를 열어 0.3mL의 분생포자 현탁액을 진딧물과 잎 디스크에 직접 분사합니다. 현탁액이 마르면 겨자 진딧물이 익사하지 않도록 덮개를 닫으십시오. 그 후, 높은 습도를 유지하기 위해 파라핀 필름을 사용하여 접종실을 밀봉합니다.
챔버를 섭씨 25도의 온도로 설정된 인큐베이터에 넣고 각각 12시간의 밝고 어두운 광주기를 사용합니다. 실체현미경을 사용하여 5일 동안 12시간마다 사망률을 계산합니다. 독성 스크리닝 결과 겨자진딧물의 생존율이 일관되게 나타났으며, 대조군은 85%의 생존율을 보였다.
동충하초 카테닌눌라타는 가장 빠른 진딧물 사멸 능력을 보였으며, 접종 후 3일과 4.5일에 50%와 90%의 진딧물 사멸 능력을 보였다. Beauveria 균주 141, 143 및 153은 3 DPI에서 5 %의 사망률로 느린 진딧물 사멸 능력을 보여주었습니다. 푸르푸레오실리움을 제외하고, 대부분의 EPF 분리체는 5 DPI 내에서 70% 이상의 보정된 사망률을 보였다.
Beauveria bassiana는 EPF 분리물 중 100%의 가장 높은 사망률을 보였습니다. EPF 진균증은 독성 스크리닝 중에 Metarhizium 종, Beauveria 종, Purpureocillium lilacinum 및 Cordyceps cateniannulata에 감염된 겨자 진딧물의 사체에서 관찰되었습니다.
