적절하게 안락사된 쥐에게 75% 알코올을 뿌려 피부를 소독하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 마우스를 누운 자세로 놓습니다. 동물의 복부 피부를 들어 올리고 수술 용 가위를 사용하여 작은 절개를 만듭니다.
그런 다음 가위를 사용하여 복부 정중선을 따라 골반에서 목까지 피부와 복부 근육을 뭉툭하게 분리합니다. 정중선의 양쪽을 따라 횡격막과 갈비뼈를 절단하여 심장과 폐를 노출시킵니다. 그런 다음 간, 비장, 장, 신장을 조심스럽게 제거하여 장벽이 손상되지 않도록 합니다.
그런 다음 폐와 식도를 제거한다. 이제 한 손에 집게를 들고 다른 손에 수술용 가위를 들고 대동맥을 척추에서 분리하여 심장을 부드럽게 들어 올립니다. 그런 다음 심장과 대동맥을 항생제가 보충된 PBS가 포함된 60mm 페트리 접시에 담습니다.
알코올에서 미세 수술 겸자와 미세 수술 가위를 꺼내 25ml의 PBS로 헹구어 과도한 알코올을 제거합니다. 실체 현미경으로 작업하여 심장과 대동맥에서 흉선과 기타 조직을 제거합니다. 그런 다음 심장을 제거하고 대동맥에 혈관 주위 지방 조직 또는 PVAT를 남깁니다.
PVAT와 함께 대동맥을 항생제가 보충된 PBS가 포함된 깨끗한 60mm 페트리 접시에 옮깁니다. 한 쌍의 미세 수술 겸자를 사용하여 대동맥을 잡고 다른 쌍을 사용하여 부착된 지방 조직을 당겨 대동맥에서 PVAT를 분리합니다. PVAT에 최소한의 손상을 입히면서 가능한 한 많은 혈관 조직을 제거하십시오.
마지막으로, 수집된 PVAT를 항생제 보충, 고포도당, DMEM이 포함된 2밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 넣고 얼음 위에 놓습니다.
