탈세포화된 사과 유래 스캐폴드의 준비 및 세포 파종(Preparation and Cell seeding of decellularized Apple-derived scaffolds)

시작하려면 만돌린 슬라이서를 사용하여 매킨토시 사과를 8mm 두께로 자릅니다. 사과 조각의 히판티움 조직을 5 x 5mm 정사각형으로 자릅니다. 정사각형 샘플을 2일 동안 0.1%SDS에 넣어 탈셀룰라화합니다.

배양 후 샘플을 탈이온수로 세척하고 실온에서 100밀리몰 염화칼슘에서 밤새 배양합니다. 그런 다음 이 지지체를 70% 에탄올로 30분 동안 살균합니다. 탈이온수로 씻고 24웰 배양판에 넣습니다.

세포 파종의 경우 세포 배양 조건에서 10cm 직경의 세포 배양 처리 접시에서 유지되는 MC3T3-E1 서브클론 4 세포를 사용합니다. 또한 스트렙토마이신에 10% 소 태아 혈청 또는 FBS와 1% 페니실린이 보충된 알파 MEM으로 구성된 세포 배양 배지를 준비합니다. 세포가 80% 밀도에 도달하면 트립신화를 통해 배양 접시에서 세포를 분리합니다.

셀 현탁액을 200g에서 3분 동안 원심분리합니다. 상층액을 흡인하고 알파 MEM에서 세포를 재현탁시킵니다. 다음으로, 세포 현탁액의 40 마이크로리터 분취액을 스캐폴드의 표면에 피펫으로 하고, 세포를 세포 배양 조건에서 1시간 동안 부착시킨다.

그런 다음 각 배양 웰에 2 밀리리터의 배양 배지를 첨가하십시오. 14일 동안 2-3일마다 배양 배지를 보충합니다. 14일 후, 세포 배양 배지에 아스코르브산 밀리리터당 50마이크로그램과 인산나트륨 4밀리몰을 첨가하여 분화 배지를 준비합니다.

이 배지를 배양 플레이트에 추가합니다. MC3T3-E1 세포의 분화를 유도하기 위해 4주 동안 스캐폴드를 배양하고 3-4일마다 배지를 보충합니다.