기계식 톱니 균질화기로 산호 샘플을 1분 동안 균질화하여 샘플이 완전히 균질화되고 덩어리가 보이지 않을 때까지 균질화합니다. 정규화를 위해 Symbiodiniaceae 세포 수, 산호 조직 단백질 함량 분석 및 엽록소-A 추정을 위해 균질화된 조직에서 1밀리리터 부분 표본을 수집합니다. 주인 물자 및 조류 세포를 분리하는 경우에, 4 섭씨 온도에 5 분 동안 2, 500 G에 잔여 산호 균질액을 분리하십시오.
호스트 물질이 포함된 상층액을 새 15밀리리터 튜브로 옮깁니다. 2 밀리리터의 차가운 초순수를 조류 펠릿에 넣고 숙주 물질과 조류 펠릿을 2분 동안 와류시켜 재현탁시킵니다. 모든 샘플을 다시 원심분리하고 호스트 물질이 포함된 상층액을 새 15밀리리터 튜브로 옮깁니다.
조류 펠릿에서 상층액을 버린 후 펠릿을 원래의 15밀리리터 튜브에 보관합니다. 홀로비온트 균질화 또는 분리된 숙주를 영하 80도의 섭씨 80도에서 최소 2시간 동안 바람을 쐬십시오. 그런 다음 섭씨 영하 85도에서 0.01밀리바 진공으로 밤새 샘플을 동결건조합니다.
건조 후 실험실 저울에서 각 샘플을 별도의 2mL 가소제가 없는 마이크로 원심분리기 튜브로 칭량합니다. 현미경 시각화는 세 번의 세척 단계 후에 숙주 조직 샘플에서 Symbiodiniaceae 세포를 발견하지 못했습니다. 유사하게, 최소 숙주 조직은 공생 분획에서 발견되었습니다.
그러나 holobiont homogenate는 세포 내 Symbiodiniaceae가 간단한 에어브러싱을 통해 공생체에서 방출되지 않았음을 나타냈습니다.
