자동화 워크스테이션을 설정하여 시작합니다. 로봇 그리퍼 암에 편리하게 접근할 수 있는 optoPlate와 같은 마이크로플레이트 조명 장치를 통합합니다. 다음으로, 사용 가능한 MATLAB 스크립트로 스프레드시트를 처리하여 optoPlate를 프로그래밍합니다.
optoPlate에 플래시를 켜서 광 자극 프로그램을 실행합니다. 로봇을 프로그래밍하려면 캐리어 및 LabWare 정의가 제대로 작동하는지 확인하기 위해 잠재적인 오류를 해결하십시오. 스크립트 루프를 통해 빈 플레이트를 여러 번 실행하여 로봇 그리퍼 암이 플레이트를 정확하게 집어 들고 배치할 수 있는지 확인합니다.
다음으로, 플레이트에서 콜로니를 선택하여 샘플 플레이트를 설정합니다. 그런 다음 유리 배양관에 담긴 3밀리리터의 합성 배지에 접종합니다. 어둠 속에서 롤러 드럼에서 섭씨 30도에서 밤새 배양물을 배양합니다.
큐벳에서 배양액 200마이크로리터를 합성 완전 배지 1밀리리터에 희석합니다. 분광 광도계를 사용하여 광학 밀도를 기록합니다. 다음으로, 각 하룻밤 배양액을 유리 배양관에서 광학 밀도 0.1로 희석합니다.
희석된 배양액을 96웰 플레이트에 피펫팅합니다. 빈 배지와 비형광 세포가 있는 웰을 음성 대조군으로 포함합니다. 섭씨 30도의 셰이커 인큐베이터에서 5시간 동안 샘플 플레이트를 배양합니다.
이제 샘플 플레이트를 히터 셰이커에 놓습니다. 실행을 클릭하여 자동화 스크립트를 시작합니다. 플레이트 리더에 초기 측정이 기록되면 조명 장치의 멀티탭을 켜서 광 자극 프로그램을 시작합니다.
광유전학 균주에 대한 시간 경과에 따른 형광 값은 전체 형광 수준이 광 자극의 듀티 사이클에 비례한다는 것을 보여주었습니다. 해당 광학 밀도 값은 일관되었으며, 이는 성장이 다양한 조명 조건의 영향을 받지 않는다는 것을 시사합니다. 서로 다른 광유전학 균주는 광 펄스 강도, 주기 및 듀티 사이클 변동에 대해 서로 다른 반응을 보였습니다.
