세포 파종을 시작하려면 기계적 또는 효소적 방법을 사용하여 세포를 분리한 후 세포를 계수합니다. 마이크로 피펫을 사용하여 기포를 피하면서 사전 준비된 전자 현미경 그리드가 포함된 6개의 웰 플레이트에 웰당 계산된 세포 수를 추가합니다. 웰당 1.5 - 2.0 밀리리터의 세포 현탁액을 유지하십시오.
HIV 분자 클론의 형질주입을 위해 섭씨 37도에서 16-24시간 동안 세포를 배양합니다. 50 마이크로리터의 무혈청 DMEM과 1 마이크로그램의 DNA를 깨끗한 마이크로 원심분리기 튜브에 넣습니다. 각각에 대해 혈청이 없는 DMEM에 있는 3마이크로리터의 transfection 시약을 별도의 깨끗한 마이크로 원심분리기 튜브에 잘 희석합니다.
마이크로 피펫을 사용하여 혼합물을 별도로 균질화합니다. 그런 다음 마이크로 피펫을 통해 형질주입 시약 혼합물을 DNA 혼합물에 첨가하고 실온에서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 100 마이크로리터의 transfection 시약과 DNA 혼합물을 그리드 바로 위에 있는 각 웰에 현명하게 떨어뜨립니다.
형질주입 후 16-24시간 후에 성장배지를 교체합니다. co-transfection 단계 후 24 시간 동안 현미경 검사와 형광을 좋아했으며 모든 그리드가 탄소 층에서 최소한의 찢어짐을 보였습니다. 모의 그리드와 co-transfection된 그리드의 세포는 여러 그리드 사각형에 생존 가능한 세포를 포함했습니다.
