시작하려면 태반 샘플의 절제 조각을 PBS에 넣습니다. 융모막판, 모체 결정체 및 눈에 보이는 경색은 표본에서 폐기하십시오. 나머지 조직 표본을 단면적 직경이 약 0.5cm인 융모 외형으로 해부합니다.
신선한 PBS로 채워진 페트리 접시에 식물을 옮깁니다. 한 쌍의 겸자를 사용하여 PBS의 각 외피를 흔들어 모든 혈액을 제거합니다. 멸균 후드 아래에서 루어 잠금 장치를 사용하여 5개의 챔버를 저장소 병에 연결합니다.
챔버를 거꾸로 뒤집고 바닥을 제거합니다. 이제 집게를 사용하여 핀이 위쪽을 향하도록 하여 금속판을 챔버의 상단 부분 중앙에 놓습니다. 챔버의 절반을 예열된 배양 배지 1m리터로 채웁니다.
저장소에 매체 20ml를 추가로 추가합니다. 집게를 사용하여 융모 외피를 챔버의 금속판 바늘에 조심스럽게 놓습니다. 하나의 챔버에 4개의 explant를 배치합니다.
챔버 바닥을 다시 부착하여 닫습니다. 다음으로, 펌프 튜브를 펌프에 연결하여 유량 회로를 생물 반응기 내부의 연동 펌프와 연결합니다. 네 번째 단계에서 수정하십시오.
Pumps(펌프) 메뉴에서 Manual(수동) 모드를 선택합니다. 펌프 속도를 분당 1밀리리터로 조정하고 실행을 클릭하여 펌핑을 시작합니다. 완전히 채워지도록 채우는 동안 챔버를 비스듬히 잡으십시오.
충전 과정이 끝나면 챔버를 다시 뒤집습니다. 챔버가 안전한지 확인하고 생물반응기의 양쪽 뚜껑을 닫습니다. 조직 배양이 완료되면 중단을 클릭하여 펌프를 중지합니다.
한 번에 두 개의 생물반응기 뚜껑과 하나의 유동 챔버를 엽니다. 추가 분석을 위해 집게를 사용하여 금속판에서 외피를 조심스럽게 제거합니다. 면역조직화학적으로 염색된 외식은 신선하고 유동 배양 조직에서 세포골격의 잘 구조화되고 조직화된 시각적 표현을 보여주었습니다.
시간이 지남에 따라 미세 필라멘트 응집은 정적 외식에서 점점 더 많이 관찰되었으며, 이는 세포골격 구조의 저하를 의미합니다. 배양 시간 동안 조직 무결성이 감소하는 것은 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin) 진술에 의해 확인되었습니다. 신선한 조직은 조밀하고 촘촘하게 포장된 기질을 보여주었습니다.
48시간의 유동 배양 후, 세포융합 영양세포의 부분적으로 분리된 단편이 관찰되었습니다. 조직 무결성은 정적 배양 조건에서 24시간 후에 이미 부적절하게 보존되었으며, 이는 48시간 후에 더욱 악화되었습니다. 내피 세포 염색은 신선한 조직에서 뚜렷하게 조직된 세포를 보여주었습니다.
형태학적 무결성은 유동 배양에서 48시간 후에도 광범위하게 유지되었습니다. 그러나 정적 이식은 24시간 후에도 부분 붕괴를 보였고 48시간 후에는 더 악화되었습니다.
