Rat Retina Excision and Mounting on Porous Membrane for Calcium Imaging

이미징 2-3주 전에 마취된 쥐의 눈의 유리체에 유전적으로 암호화된 칼슘 지시약을 운반하는 바이러스 입자를 주입합니다. 안저경 검사와 OCT를 사용하여 망막 구조에 칼슘 지시약 주입으로 인한 부작용을 검사합니다. 주사 2주 후, 신경절 세포층 또는 GCL은 형광 방출을 나타냈습니다.

그런 다음 안락사된 쥐의 망막 절제가 시작됩니다. AAV2-CAG-GCaMP5G를 발현하는 눈을 취하고 작은 곡선 집게와 가는 스프링 가위를 사용하여 안구 주변의 모든 조직을 제거합니다. 다음으로 3 x 3cm 크기의 여과지를 가져 가라.

3.5cm 접시의 덮개에 놓고 여과지를 AIMS 배지로 흠뻑 적십니다. 앞쪽 세그먼트가 작업자를 향하도록 안구를 종이에 놓습니다. 한 쌍의 직선 집게를 사용하여 접시 표면에서 약 45도 각도로 안구를 잡습니다.

직선 집게 사이의 틈을 사용하여 칼날로 절개를 안내합니다. 그런 다음 안구를 AIMS 매체에 담그십시오. 직선 집게와 가는 스프링 가위를 사용하여 눈의 앞쪽과 뒤쪽 부분을 분리합니다.

두 쌍의 직선 집게를 사용하여 렌즈를 조심스럽게 제거하고 공막에서 망막을 분리합니다. 가는 스프링 가위를 사용하여 공막을 시신경 쪽으로 절개하고 망막이 안구에서 성공적으로 분리될 때까지 자릅니다. 절단된 팁 플라스틱 피펫을 사용하여 망막의 절제된 부분을 장착 멤브레인으로 옮깁니다.

그런 다음 한 쌍의 직선 집게를 사용하여 망막을 평평하게 장착하고 신경절 세포층이 위쪽을 향하도록 합니다. 다음으로, 100 마이크로리터 피펫 팁이 장착된 플라스틱 피펫을 사용하여 매체를 제거하여 망막 조각이 다공성 막에 쉽게 부착되도록 합니다. 그런 다음 어셈블리를 마이크로 전극 어레이 또는 MEA로 뒤집어 GCL을 전극 위에 놓습니다.

그런 다음 산소가 함유된 AIMS 배지로 샘플 수조를 채웁니다.