Splitting of Murine Retina for Immunofluorescence Analysis

쥐 망막이 들어 있는 페트리 접시의 Ames 배지를 탄수화된 Ames의 신선한 공급으로 교체하는 것으로 시작하십시오. 넓은 입 이동 피펫을 사용하여 절개된 쥐 망막 조각을 신경절 세포가 위로 향하게 한 유리 슬라이드에 놓습니다. 섬세한 작업용 물티슈로 과도한 액체를 제거하여 평평하게 만듭니다.

필요한 경우 가는 붓을 사용하여 해부 현미경으로 망막 가장자리를 부드럽게 잡아당깁니다. 집게를 사용하여 니트로셀룰로오스 막의 마른 조각을 망막에 놓고 신경절 세포 쪽에 부착합니다. 망막을 뒤집어 유리 슬라이드에 니트로셀룰로오스를 놓고 망막의 광수용체 쪽에 다른 마른 막 조각을 놓습니다.

이제 에임스 미디어로 붓 끝을 적십니다. 균일한 접착을 돕기 위해 상부 멤브레인에 부드러운 아래쪽 압력을 가합니다. 그런 다음 한 쌍의 집게로 하부 멤브레인을 유리에 고정합니다.

그런 다음 다른 쌍을 조심스럽게 사용하여 천천히 일정한 동작으로 상부 멤브레인을 떼어냅니다. 광수용체가 들어있는 상부 막을 폐기하십시오. 마지막으로, 내부 망막이 포함된 하부 막을 탄화된 Ames 배지로 되돌립니다.