Isolation of Single-Fiber from Freeze-Dried Human Skeletal Muscle

시작하려면 동결 건조된 근육 샘플을 실체 현미경 아래에 놓고 저배율로 봅니다. 한 쌍의 미세 조직 해부 겸자를 사용하여 근육을 제자리에 고정하고 다른 겸자와 함께 작은 섬유 다발을 분리합니다. 섬유 다발 하나를 분리하고 다발에서 단일 섬유 세그먼트가 추출될 때까지 부드럽게 떼어냅니다.

그런 다음 섬유질을 페트리 접시의 깨끗한 영역으로 옮깁니다. 각 단일 섬유 세그먼트를 50배 배율로 조사합니다. 한쪽 끝에서 섬유를 더 분리해 보십시오.

섬유가 끊어지기 시작하면 단일 섬유입니다. 한 쌍의 집게로 섬유를 조심스럽게 수집하여 이전에 준비된 변성 완충액의 부분 표본에 넣습니다. 튜브를 벤치에 세 번 단단히 두드립니다.

그 후, 섬유 샘플을 와동시키고 2, 500G에서 5초 동안 간략하게 원심분리하여 샘플이 튜브 바닥에 침전되도록 합니다. 샘플을 실온에서 1시간 동안 그대로 두었다가 나중에 사용할 수 있도록 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.