Dextran-FITC 주입 및 매트릭스 겔 플러그 수집(Matrix Gel Plug Assay)을 위한 마우스의 Matrix Gel Plug Collection

마우스에 덱스트란을 주입하기 위해, 매트릭스 겔 주입 후 7일 후, 0.5 밀리그램의 덱스트란, FITC를 500 마이크로리터의 이중 증류수에 RESUSPEND한다. 마이크로리터당 1마이크로그램의 덱스트란, FITC 용액을 얻기 위해 철저히 소용돌이칩니다. 29게이지 주사기에 50마이크로리터의 Dextran FITC 용액을 채웁니다.

꼬리 정맥 주사 기구에 마우스를 고정하고 75% 알코올에 적신 면봉으로 꼬리를 소독한 후 주사기에 50마이크로리터의 Dextran FITC 용액을 꼬리 정맥에 조심스럽게 주입합니다. 면봉으로 주사 부위에 1분간 압력을 가해 출혈을 가라앉힌다. 마우스를 케이지로 되돌리고 매트릭스 젤 플러그를 모으기 전에 30분 동안 휴식을 취하십시오.

젤 플러그를 수집하려면 수술용 가위를 사용하여 플러그의 표시된 경계를 따라 안락사된 쥐의 피부를 자릅니다. 그리고 매트릭스 젤 플러그 위의 피부를 제거합니다. 플러그를 모으고 인산염 완충 식염수로 비커에 헹구어 여분의 혈액을 씻어냅니다.

다음으로, 조직 임베딩 카세트의 바닥을 약 0.5ml의 조직 임베딩 젤로 덮습니다. 그런 다음 매트릭스 젤 플러그를 계획된 방향으로 조직 매립 젤에 신속하게 놓습니다. 추가 티슈 매립 젤로 플러그를 매립합니다.

카세트를 섭씨 영하 80도에서 12시간 동안 굳힙니다. 응고된 플러그 블록을 제거한 후 냉동 마이크로톰을 사용하여 12미크론 두께의 부분을 자릅니다. 그런 다음 섹션을 현미경 슬라이드에 장착합니다.