먼저, 간상 광수용체 특이적 프로모터(rod photoreceptor specific promoter)에서 GFP와 니트로 환원효소(nitro reductase, NTR)를 발현하는 형질전환 계통을 사용합니다. NTR은 전구약물 메트로니다졸(MTZ)을 NTR 발현 간상체의 선택적 절제를 위한 세포독성제로 전환합니다. GFP 모니터링을 위해 숟가락을 사용하여 마취된 올챙이 한 마리를 부드럽게 잡고 작은 페트리 접시 안의 축축한 조직 위에 조심스럽게 놓습니다.
형광 실체 현미경으로 GFP 형광을 관찰하고 눈의 사진 이미지를 캡처합니다. 올챙이와 함께 페트리 접시를 완전히 깨어날 때까지 기르는 물이 있는 큰 탱크에 조심스럽게 담그십시오. 망막 변성의 개별 모니터링을 위해 각 올챙이를 30ml의 10밀리몰 MTZ 또는 대조 용액의 형질전환 형제가 들어 있는 작은 용기에 넣습니다.
일괄 처리를 위해 형질전환 올챙이를 1리터의 MTZ 또는 대조 용액과 함께 더 큰 용기에 넣습니다. 올챙이를 MTZ의 저하를 피하기 위해 어둠 속에서 섭씨 20도에서 일주일 동안 올챙이를 들어 올립니다. 7 일 후에, 형광성 입체 현미경의 밑에 GFP를 관찰하고 눈의 사진 이미지를 붙잡으십시오.
형광 강도의 감소 또는 형광의 사실상 부재는 간상체의 열화를 나타냅니다. MTZ로 처리한 형질전환 올챙이의 눈은 대조군에 비해 GFP 형광의 감소를 보였으며, 이는 GFP 면역 염색에 의해 망막 절편에서 추가로 확인되었습니다.
