Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

iBBB 모델을 조립하기 위해 분화된 내피 세포, 기생충 및 성상세포를 준비하는 것으로 시작합니다. 분화된 내피 세포로부터 세포 배양 배지를 흡인한 후, PBS로 세포를 한 번 세척한 후, 세척된 세포에 프로테아제 콜라겐분해효소 혼합물을 첨가하고 섭씨 37도에서 5분 동안 세포를 해리시킨다. 프로테아제 콜라겐분해효소 혼합물을 해리된 세포와 함께 hECSR을 함유하는 원추형 튜브에 옮기고, 혼합물과 hECSR의 1:3 비율을 유지한 다음, 세포를 300G에서 3분 동안 원심분리하고 상층액을 흡인한 후 생성된 세포 펠릿을 hECSR에 재현탁시킵니다.

분화된 기생충을 프로테아제 콜라겐분해효소 혼합물과 섭씨 37도에서 5분 동안 해리시킵니다. 원뿔형 튜브에 적절한 양의 N2B27을 첨가하고 프로테아제 콜라겐 분해 효소 혼합물의 해리 된 세포를 N2B27에 대한 혼합물의 1 : 3 비율로 유지하여 전달합니다. 300G에서 3분 동안 셀을 회전시킵니다.

상층액을 흡인한 후 세포 펠릿을 N2B27에 재현탁시킵니다. 분화된 성상세포를 프로테아제 콜라겐분해효소 혼합물과 섭씨 37도에서 5분 동안 해리시킵니다. 프로테아제 콜라겐분해효소 혼합물의 해리된 세포를 혼합물과 배지의 1:3 비율로 완전한 성상교세포 배지를 포함하는 원추형 튜브로 옮깁니다.

세포를 300G에서 3분 동안 원심분리한 후, 상층액을 흡인하고 세포 펠릿을 완전한 성상세포 배지에 재현탁시킵니다. 이제 셀이 iBBB를 조립할 준비가 되었습니다.