Reviving the Cryopreserved Day 32 hESC-Derived Photoreceptor Progenitors

PRDM을 섭씨 37도로 설정된 수조에 넣는 것으로 시작합니다. 액체 질소에서 32일 hESC 유래 광수용체 전구 세포가 포함된 극저온 세포를 제거하고 드라이아이스 위에 보관합니다. 그런 다음 섭씨 37도의 수조에서 3-5분 동안 냉동 공기를 해동합니다.

PRDM 1밀리리터로 셀을 다시 현탁시킵니다. 130G에서 4분 동안 원심분리 상층액을 제거한 후 펠릿을 PRDM 1밀리리터에 다시 현탁시킵니다. 세포를 계산하려면 10 마이크로 리터의 세포 현탁액을 가져 와서 제조업체의 지침에 따라 0.2 % 트리판 블루와 혼합하십시오.

세포 혼합물을 세포 계수 챔버 슬라이드에 피펫팅하고 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 수와 생존율을 측정합니다. 세포 생존율이 70% 이상이면 나머지 세포 현탁액을 130G에서 4분 동안 원심분리합니다. 상층액을 제거하고 이식을 위해 세포 펠릿을 PRDM에 다시 현탁시킵니다.

10마이크로리터 피펫 팁을 사용하여 덩어리가 보이지 않을 때까지 세포 덩어리를 마이크로퓨지 튜브에 다시 부유시킵니다. 현탁액을 33게이지 주입 주사기에 넣고 바늘을 통해 세포 용액의 압출을 확인합니다.