Mouse Splenic Single-Cell Suspension Generation and FACS Staining for Flow Cytometry-Based Sorting

시작하려면 70밀리리터 원심분리기 튜브 위에 50미크론 셀 스트레이너를 놓고 PBS로 적십니다. 마우스에서 비장을 분리한 후 단일 세포 현탁액을 생성하려면 주사기 플런저의 엄지 받침대와 30밀리리터의 차가운 PBS를 사용하여 메쉬를 통해 비장을 통과시킵니다. 여과액을 300G에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거합니다.

펠릿을 1밀리리터의 암모늄-염화물-칼륨 용해 완충액에 재현탁시키고 실온에서 2분 동안 배양합니다. 용해 후 50ml의 차가운 PBS를 튜브에 넣은 다음 원심 분리하고 상층액을 버리고 펠릿을 새로 준비한 항체 칵테일에 재현탁시킵니다. 세포 현탁액을 5밀리리터 FACS 튜브에 옮기고 어둠 속에서 섭씨 4도에서 30분 동안 배양합니다.

배양 후 3밀리리터의 콜드 PBS를 튜브에 첨가한 다음 원심분리하여 상층액을 버리고 펠릿을 콜드 FACS 재현탁 완충액 1밀리리터에 재현탁시킵니다. 필터 캡 FACS 튜브를 통해 세포를 필터링합니다.