Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

시작하려면 FBS, 페니실린 및 스트렙토마이신을 함유한 DMEM 세포 배양 배지를 준비합니다. 또한 100마이크로리터의 DMSO에 1.30mg의 염화코발트를 첨가하여 100밀리몰 염화코발트 원액을 준비합니다. 다음으로, DMEM 배지가 포함된 100밀리리터 배양 접시에 BEND3 세포 1밀리리터를 파종하고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소의 가습 분위기에서 배양합니다.

2-3일마다 배지를 교체하고 일주일에 두 번 세포를 하위 배양합니다. BEND3 세포가 80% 합류로 성장한 후 30초 동안 0.25% 트립신으로 세포를 분해합니다. 세포 계수기를 사용하여 세포를 계산하고 밀도를 7 곱하기 10에서 밀리리터당 네 번째 세포까지 현탁액을 만듭니다.

그런 다음 세포 접착을 위해 이 세포 현탁액 100마이크로리터를 96웰 플레이트에 파종합니다. 그런 다음 PBS로 세포를 세척하고 염화 코발트가 함유 된 배양 배지 100 마이크로 리터를 첨가합니다. 24시간 동안 세포를 배양합니다.

배양 후 배지를 제거하고 PBS로 세척하십시오. 다음으로 100마이크로리터의 CCK-8 용액을 추가합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양한 다음 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450나노미터에서 흡광도를 측정합니다.

이 공식에 따라 염화코발트에 의해 유도된 세포 생존율을 계산합니다. 대조군과 비교하여 세포 생존율 감소에 유의한 차이가 있는 농도를 선택합니다. 다양한 농도의 염화코발트로 처리된 BEND3 세포의 생존력은 CoCl2로 분석되었습니다.

그 결과 300 마이크로 몰의 염화 코발트가 시험관 내에서 상당한 세포 독성을 나타냈다는 것을 나타냈습니다.