두 개의 실리콘 플레이트를 고압멸균한 후 멸균 조건에서 오토클레이브 백에서 플레이트를 제거하고 150mm 플레이트에 넣습니다. 400 마이크로 리터의 피브로넥틴 용액을 실리콘 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 다음으로, MSC 배지에서 공막 양성 유도 중간엽 기질 세포를 다시 현탁시키고 자동 세포 카운터를 사용하여 생존 가능한 세포를 계수합니다.
제곱센티미터당 1.25 곱하기 10에서 네 번째 세포를 얻는 데 필요한 세포 현탁액의 부피를 계산합니다. 15밀리리터 원뿔형 튜브에서 이 부피의 MSC 스트레치 배지를 제거하고 필요한 부피의 공막 양성 유도 중간엽 기질 세포 현탁액을 추가합니다. 새 세포 현탁액의 균질성을 위해 튜브를 뒤집습니다.
400마이크로리터의 셀 현탁액을 두 실리콘 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 150mm 접시에 뚜껑을 다시 덮고 접시를 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양합니다. 단축 장력의 경우 스트레칭 장치를 이중 증류수로 헹구고 70% 에탄올을 헹굽니다.
장치를 닦고 세포 배양 후드에 넣고 15분 동안 자외선에 노출시킵니다. 다음으로, 정적 제어로 인큐베이터에 플레이트 하나를 놓습니다. 나사를 실리콘 판의 구멍에 맞춰 두 번째 장착된 실리콘 판을 스트레칭 장치에 놓습니다.
그런 다음 장치에 뚜껑을 놓습니다. 실리콘 플레이트가 장착된 장치를 전자 소스에 부착하고 섭씨 37도의 인큐베이터에 넣습니다. 순환 스트레칭 프로그램을 하루 2시간 동안 0.5헤르츠의 4% 정현파 변형률로 설정합니다.
시작 버튼을 눌러 스트레칭을 시작합니다. 공막 양성 유도 중간엽 기질 세포의 기계적 로딩 동안, 과도하게 높은 파종 밀도는 조기 세포 수축과 조기 세포 사멸을 초래했습니다. 며칠 동안 스트레칭을 한 후, 공막-양성 유도 중간엽 기질 세포 스트레치 그룹에서 어느 정도의 세포 조직이 관찰되었는데, 이는 정적 그룹의 무작위 세포 조직과 비교되었습니다.
액톤 필라멘트의 팔로이딘 염색은 정적 플레이트에서 관찰된 무작위 세포 조직과 달리 세포가 스트레치 방향에 수직으로 성장하는 것을 보여주었습니다. 유전자 발현 분석은 0일째에 IMSC에 비해 3일과 7일 모두에서 tenogenic 유전자의 상당한 상향 조절을 보여주었습니다. 스트레칭 7일 후 배지 내 콜라겐 침착은 다른 모든 그룹에 비해 공막 양성 유도 중간엽 기질 세포 스트레치 그룹에서 유의하게 높았습니다.
