Quantification of mRNA in TMEM200A siRNA Transfected Stomach Adenocarcinoma Cells

먼저 위 선암 세포를 TMEM200A siRNA로 transfection하고 이틀 동안 배양합니다. 그런 다음 웰에서 세포 배양 배지를 버리고 PBS 1mL로 세포를 두 번 부드럽게 세척합니다. RNA 분리 키트를 사용하여 세포의 총 RNA를 분리합니다.

제조업체의 지침에 따라 cDNA 합성 키트를 사용하여 RNA 농도를 추정하고 1마이크로그램의 RNA로 cDNA를 합성합니다. 이제 10 마이크로리터 반응 혼합물에서 cDNA의 10배 희석에 대한 정량적 RTPCR을 설정합니다. Realtime PCR 분석 시스템을 사용하여 프라이머와 정량적 PCR 마스터 믹스를 추가합니다.

여기에 표시된 정량적 PCR 반응 조건을 사용하고 이중 델타 CT 기법을 사용하여 각 유전자의 상대적 발현을 결정합니다. HGC-27 세포주는 GES-1 세포주에 비해 TMEM200A 단백질과 mRNA 전사체를 극적으로 과도하게 발현했습니다. 인간 위암 세포인 SGC-7901에서 TMEM200A의 차등 mRNA 발현은 GES-1 세포보다 높습니다.