Light Exposure Experiment to Activate BMP or Nodal Signaling in Zebrafish

먼저 주입된 제브라피시 배아를 섭씨 28도에서 배양합니다. 4-16 세포 단계에서 약 1.5 HPF를 사용하여 수정되지 않은 건강하지 않은 배아를 제거합니다. 표현형 분석을 위해 노출되지 않은 대조판을 알루미늄 호일에 주입되지 않은 배아와 주입된 배아로 감쌉니다.

호일로 덮인 판을 하단 선반에 놓고 노출된 판을 섭씨 28도 라이트 박스의 상단 선반에 놓습니다. 접시 덮개가 제자리에 있는지 확인한 후 청색광을 활성화하고 라이트 박스 도어를 닫아 의도하지 않은 실내 빛 노출을 방지하십시오. 약 1.5HPF의 면역형광 분석의 경우, 대리 접시를 포장하지 않은 상태로 유지하면서 노출된 접시와 노출되지 않은 접시를 알루미늄 호일로 개별적으로 포장합니다.

LED를 활성화하지 않고 모든 접시를 섭씨 28도 라이트 박스에 넣으십시오. 실내 조명에 부주의하게 노출되는 것을 방지하기 위해 라이트 박스 도어를 닫으십시오. 약 5HPF에서 해부 스코프를 사용하여 대리 배아의 발달 단계를 평가합니다.

또한 모든 접시에 균일한 온도 노출을 보장하기 위해 포장된 접시를 제거하십시오. 대리 배아가 40%에 도달하면 노출된 접시의 뚜껑을 열고 라이트 박스의 상단 선반에 놓습니다. 노출되지 않은 접시는 하단 선반에 덮어 두십시오.

즉시 파란불을 켜고 문을 닫은 후 타이머를 20분으로 맞춥니다. 고정을 준비하려면 가능한 한 많은 실내 조명을 제거하십시오. 고정 직전에 섭씨 4도에서 포름알데히드 4%가 포함된 튜브를 가져와 라이트 박스 옆에 놓습니다.

20분 후 라이트 박스의 문을 열고 빛에 노출되지 않은 접시를 꺼냅니다. 화염 유리 피펫 팁을 사용하여 접시에서 빛에 민감한 배아를 제거합니다. 그런 다음 배아를 4% 포름알데히드에 담그려면 화염이 붙은 유리 피펫 팁을 포름알데히드에 담그고 배아가 액체에 가라앉도록 합니다.

고정된 배아는 섭씨 4도에서 밤새 보관합니다.