Evaluation of bOpto-BMP/Nodal Expressing Embryos After the Light Exposure Experiment

표현형 분석을 위해 bOpto-BMP bOpto-Nodal 발현 제브라피시 배아에 대한 광 노출 실험을 수행하고 수정 후 1일 24-32 HPF 사이에서 라이트 박스에서 제거합니다. 해부 범위를 사용하여 표현형을 평가하고 채점 기준표를 설정합니다. 편의상 융모막 내에 남아 있는 동안 배아를 평가합니다.

피펫을 사용하여 프로브를 사용하여 다양한 각도에서 볼 수 있도록 배아의 위치를 변경합니다. 면역형광 분석의 경우, 배아를 섭씨 4도에서 밤새 4% 포름알데히드로 배양한 후 포름알데히드를 제거하고 PBST로 3-5회 헹굽니다. PBST를 버리고 100% 메탄올을 첨가하십시오.

튜브를 밀봉하고 부드럽게 뒤집어 잔류 PBST와 메탄올을 혼합합니다. 배아를 메탄올로 두 번 더 세척한 후 섭씨 영하 20도에서 최소 2시간 동안 최대 몇 년 동안 보관합니다. 광학 절편을 위해 장착된 현미경을 사용하여 면역 염색된 배아의 이미지를 캡처합니다.

적절한 mRNA 양과 빛 노출 조건을 사용한 면역형광 염색 실험은 pSmad 수준이 비슷하고 노출되지 않은 배아에서 주입되지 않은 반면, 주입된 빛에 노출된 배아는 더 높은 수준의 Smad 인산화를 나타냈다는 것을 보여주었습니다.