AcroSensE를 발현하는 형질전환 모델 마우스에서 분리한 코타 부고환에서 정자를 수집하는 것으로 시작합니다. 섭씨 37도에서 15분 동안 수영 절차를 허용하여 0.5ml의 MW 배지가 포함된 3.5cm 조직 배양 접시에서 정자 수집을 수행합니다. 그런 다음 미세한 집게를 사용하여 수영 수집 접시에서 부고환 조직을 조심스럽게 제거합니다.
정자를 포함하는 배지를 15 밀리리터의 원뿔형 튜브에 옮기고 스윙 버킷 로터를 사용하여 실온에서 1 분 동안 100G의 현탁액을 원심 분리합니다. 플라스틱 피펫을 사용하여 정자가 포함된 MW 상청액을 수집하고 총 조직 파편 펠릿을 버리고 둥근 바닥 튜브로 옮깁니다. 섭씨 37도로 예열된 MW 배지 500마이크로리터를 추가하여 상층액 부피를 1밀리리터로 조정합니다.
이 혼합물을 둥근 바닥 튜브에서 실온에서 8분 동안 400G으로 원심분리합니다. 그런 다음 느슨하게 펠릿화된 정자를 남겨두고 상청액을 조심스럽게 제거합니다. 큰 구멍의 이송 파이프를 사용하여 손가락 튕기기로 알려진 튜브를 수동으로 부드럽게 두드려 정자를 다시 부유시킵니다.
정자가 고르게 다시 부유되면 새로운 둥근 바닥 튜브로 옮깁니다.
