Setting up the Single Cell Stimulant Delivery System for Real-Time Monitoring of Live Mouse Sperm

시작하려면 적절한 설정에 따라 외경이 2mm이고 내경이 1.56mm인 붕규산 유리 모세관을 당깁니다. 각 실험 전에 모세관을 채우기 전에 미세한 핀셋을 사용하여 모세관 끝을 부러뜨립니다. 모세관을 적재하기 위해, 요구된 자극제의 정상 농도의 3배에서 5배에 자극 용액을 사용하십시오.

얇은 플라스틱 이송 피펫을 사용하여 길이의 3/4이 채워질 때까지 자극 용액을 모세관에 천천히 주입합니다. 모세관을 부드럽게 튕겨 충전 과정에서 형성될 수 있는 기포를 제거합니다. 그런 다음 채워진 모세관을 마이크로 매니퓰레이터에 장착합니다.

5psi에서 10초 펄스를 제공하도록 단일 세포 전달 시스템 설정을 구성합니다. 마이크로 매니퓰레이터에 장착된 붕규산 모세관을 단일 세포 전달 시스템 피펫 홀더에 연결합니다. 20psi의 압력에서 2초 동안 짧은 퍼프를 가하면서 모세관 팁을 관찰하여 용액이 팁 끝을 통해 분배되고 있는지 확인합니다.

이제 이 설정은 단일 쥐 정자의 실시간 이미징을 위한 현미경 검사와 함께 사용할 준비가 되었습니다.