35mm 커버슬립 접시에 Poly-D-Lysine 또는 PDL을 코팅하는 것으로 시작합니다. 이렇게 하려면 커버슬립 접시 중앙에 0.5마이크로리터의 PDL 방울을 분주합니다. 10마이크로리터 눈금이 매겨진 피펫을 사용하여 커버슬립에 PDL 방울을 바릅니다.
코팅된 커버슬립 접시를 섭씨 37도에서 10분 동안 건조시킵니다. AcroSensE를 발현하는 마우스 모델에서 갓 채취한 정자를 이미징하기 위해 준비된 정자 현탁액 80마이크로리터를 PDL 코팅 커버슬립 접시 중앙에 추가합니다. 그런 다음 섭씨 37도로 미리 데워진 보충 및 수정된 Whitten의 기본 배지 3ml를 접시에 천천히 추가합니다.
현미경과 단일 세포 자극제 전달 설정의 조합을 사용하여 이미징을 수행합니다. 먼저 정자가 들어있는 접시를 현미경에 장착합니다. 그런 다음, 미세 매니퓰레이터를 사용하여, 자극제 전달 시스템의 모세관 선단을 측면으로 약 100 미크론, 관심 세포의 평면에서 5 내지 10 미크론 위에 위치시킨다.
정자 머리에서 100미크론 이내에 모세관을 배치합니다. 그런 다음 현미경에서 이미징 시퀀스를 시작합니다. 높은 프레임 속도로, 바람직하게는 초당 10 프레임 이상으로 정자 세포를 이미지화합니다.
이미지 획득을 시작한 후 10초 후에 단일 세포 전달 시스템을 활성화하여 10초 동안 각성제를 퍼프합니다. 10분에서 15분 동안 세포 이미지를 계속 캡처합니다. 비슷한 방식으로 화면에 표시된 위치에 따라 단일 접시에서 여러 셀을 이미지화합니다.
