SWITCH - H2O2 - Antigen Retrieval - TDE (SHORT) Tissue Transformation Technique

포르말린으로 고정되고 파라핀이 박힌 뇌 부분을 나사 뚜껑이 있는 접시에 넣는 것으로 시작합니다. 접시에 스위치 끄기 용액을 부착하고 알루미늄 호일로 덮고 하루 동안 흔들면서 섭씨 4도에서 배양합니다. 다음 날, 모든 샘플을 새 접시로 옮기고 앞과 같이 스위치를 켠 용액으로 배양합니다.

배양이 끝나면 샘플을 튜브에 넣고 흔들면서 2시간 동안 PBS로 세 번 세척합니다. 그런 다음 샘플에 불활화 용액을 추가하고 섭씨 37도로 설정된 수조에서 밤새 배양합니다. 세 번 세척한 후 샘플에 투명화 용액을 추가하고 섭씨 55도의 수조에서 3-7일 동안 배양합니다.

배양이 끝나면 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 PBST로 샘플을 3시간 동안 세척합니다. 다음날 각 샘플에 30% 과산화수소 10mL를 첨가하고 상온에서 흔들면서 PBS로 샘플을 10분 동안 3회 세척합니다. 다음으로, 항원 회수 용액을 수조에서 섭씨 95도로 예열합니다.

샘플을 가열된 용액에 옮기고 섭씨 95도에서 10분 동안 배양한 다음 셰이커에서 실온에서 40분 동안 배양합니다. 흔들면서 탈이온수로 5분 동안 샘플을 세척합니다. PBS에서 샘플을 평형화합니다.

이제 샘플을 나사 뚜껑이 있는 접시로 옮깁니다. 모든 샘플에 대한 새로운 1차 항체 용액을 비커에 준비한 후 샘플에 넣고 섭씨 37도에서 어둠 속에서 부드럽게 흔들면서 1-7일 동안 배양합니다. 그런 다음 샘플을 튜브에 넣고 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 미리 예열된 PBST를 사용하여 세척합니다.

샘플을 스크류 뚜껑이 있는 접시로 옮기고 PBST와 0.01%아지드화나트륨으로 준비된 2차 항체를 추가합니다. 샘플을 튜브로 옮기고 예열된 PBST로 섭씨 37도에서 2시간 동안 흔들면서 3회 세척합니다. 굴절률 일치를 위해 샘플을 새 접시에 넣고 TDE의 30% 용액을 추가합니다.

그런 다음 샘플에서 30%TDE를 68%TDE 용액으로 교체하고 흔들면서 실온에 둡니다. 짧은 처리 후, 모든 조직 절편의 최적이고 균질한 투명도는 회백질과 백질 모두에서 달성되었습니다.