Diatom DNA Extraction from Water Sample and Human Lung Tissue Using a Modified DNA Extraction Kit

시작하려면 원심 분리 튜브에서 규조류 물 샘플 10ml를 채취하십시오. 튜브를 13, 400G에서 5분 동안 원심분리합니다. 피펫 건으로 9.8ml의 상층액을 조심스럽게 버립니다.

그런 다음 농축된 규조류 물 샘플 200마이크로리터를 2밀리리터 원심분리 튜브에 옮깁니다. 다음으로, 익사한 인체에서 0.5g의 폐 가장자리 조직을 채취합니다. 가위로 폐 조직이 진흙 투성이가 될 때까지 자릅니다.

규조류 및 폐 시료에서 DNA를 추출하려면 먼저 두 시료 모두에 유리 구슬을 추가합니다. 샘플을 잘 혼합한 후 40마이크로리터의 proteinase K를 튜브에 추가합니다. 실온에서 15분 배양한 후 두 튜브에 200마이크로리터의 결합 완충액을 추가합니다.

즉시 샘플을 와류 믹서로 4분 동안 혼합합니다. 그런 다음 튜브를 섭씨 70도의 수조에 10분 동안 넣습니다. 해결책이 명확해질 때까지.

다음으로, 응집성 침전물로 맑은 용액을 옮긴다. 실리콘 매트릭스로 포장된 3cm 길이의 흡착 컬럼으로. 컬럼을 8, 000G에서 30초 동안 원심분리합니다.

그런 다음 수집 튜브에 있는 폐액을 버리고 컬럼을 수집 튜브에 다시 넣습니다. 이제 500 마이크로리터의 억제제 제거 완충액을 컬럼에 넣고 13, 400 G에서 30초 동안 원심분리합니다. 폐액을 버린 후 세척 완충액 700마이크로리터를 컬럼에 추가하고 다시 원심분리합니다.

폐액을 버린 후 흡착 컬럼을 빈 수집 튜브에 다시 넣습니다. 컬럼을 14, 500G에서 2분 동안 원심분리하여 가능한 한 많은 세척 버퍼를 제거합니다. 이제 컬럼을 꺼내 깨끗한 원심분리기 튜브에 넣습니다.

100 마이크로리터의 용출 완충액을 흡착막의 중간 부분에 추가합니다. 컬럼을 13, 400G에서 실온에서 5분 배양 후 1분 동안 원심분리합니다. 다시 원심분리하기 전에 수집 튜브에서 얻은 용액을 흡착 컬럼으로 다시 옮깁니다.

용출된 규조류 DNA를 섭씨 2도에서 8도까지 보관하여 나중에 사용할 수 있습니다. 아가로스 겔 전기영동은 PCR 증폭 후 물 샘플과 조직 모두에서 250 내지 500 BP 사이의 규조류 DNA 밴드를 보여주었습니다.