시작하려면 평평한 직사각형 자석을 선택하여 스트립 패턴용 자석 세트를 조립합니다. 2mm 두께의 실리콘 판을 2 x 8 x 30mm 크기의 직사각형으로 자릅니다. 그런 다음 직사각형 자석과 실리콘 판을 층별로 조립합니다.
도트 어레이 패턴의 경우 각 자석 세트가 36 x 6 그리드에 배열된 6개의 원통형 자석으로 구성되도록 미니어처 원통형 자석을 조립합니다. 세포 배양 장치를 준비하려면 펀처를 사용하여 2mm 두께의 실리콘 플레이트에 1 x 1cm 직사각형 구멍을 만듭니다. 구멍 주위의 실리콘 판을 다듬어 구멍이 중앙에 있는 둥근 금형을 만듭니다.
살균을 위해 금형을 초음파 세척기에 넣으십시오. 깨끗한 물로 10분 동안 금형을 소독합니다. 그런 다음 물을 75% 에탄올로 10분 동안 교체합니다.
멸균기 상자에서 섭씨 65도에서 60분 동안 곰팡이를 건조시킵니다. 그런 다음 멸균된 실리콘 몰드를 25mm 원형 유리 셀 슬라이드에 부착하고 실리콘이 유리에 부착되도록 몰드를 부드럽게 누릅니다. 자석 세트를 6웰 플레이트에 놓고 세포 배양 장치를 자석 세트 위에 놓습니다.
30 밀리몰 Gd-DTPA 주입 용액을 준비하려면 30 마이크로 리터의 Gd-DTPA와 470 마이크로 리터의 완전한 세포 배양 배지를 혼합합니다. 셀 패턴을 만들려면 HUVEC 현탁액을 200G에서 5분 동안 원심분리합니다. 그리고 펠릿을 Gd-DTPA 함유 배지에 다시 현탁시킨다.
세포 계수 후 Gd-DTPA 함유 배지를 사용하여 세포 밀도를 밀리리터당 약 2배 10에서 5 세포로 조정합니다. 세포 현탁액을 부드럽게 혼합하고 세포 배양 몰드의 공동에 200마이크로리터를 추가하여 가장자리가 가득 찬 액체 표면을 만듭니다. 세포가 기질에 달라붙을 때까지 3-6시간 동안 플레이트를 배양합니다.
배양 후 Gd-DTPA 함유 배지를 완전한 배양 배지로 교체하고 자석 세트에서 세포 배양 장치를 제거합니다. 줄무늬 세포 패터닝을 위한 세포 배양 장치를 준비하려면 장치의 두꺼운 실리콘 플레이트를 얇은 플레이트로 교체합니다. 앞에서 설명한 대로 첫 번째 유형의 세포를 패터닝한 후 세포 배양 장치를 아래 자석에서 오른쪽으로 1mm 이동합니다.
두 번째 유형의 셀에 동일한 패턴 절차를 적용합니다. 그리고 제3 세포 배양 장치를 아래 자석에서 오른쪽으로 1mm 이동시킨다. 설명된 대로 세 번째 유형의 세포를 패턴화합니다.
모든 유형의 세포를 패터닝한 후 200마이크로리터의 PBS로 유리 슬라이드를 두 번 세척합니다. 마지막으로 PBS를 완전한 세포 배양 배지로 교체합니다. 12시간 동안 Gd-DTPA로 처리한 HUVEC에 대해 수행된 생존도 시험은 50밀리몰 Gd-DTPA를 제외하고는 세포 생존율의 유의한 감소를 보여주지 않았으며, 이는 통계적 차이를 초래했지만, 약 90%의 생존율을 유지했다.
