Obtaining Wildtype and Transgenic Zebrafish Larvae and WildType Whole Larvae Dissociation

각 번식 설정에서 야생형 및 형질전환 제브라피시 알을 얻는 것으로 시작합니다. HEPES 완충 E3 배지 또는 E3가 포함된 15cm 페트리 접시를 가져갑니다. 그리고 원하는 제브라피시 사육 시설에서 적절한 양의 수정란을 수집합니다. E3에서 수정란을 섭씨 28도에서 적절한 밝음과 어두움 주기로 배양합니다.

수정 후 1 일 또는 dpf에서 수정되지 않은 난자를 제거하고 수정 된 난자가 5 dpf까지 발달하도록 두십시오. 하나의 dpf에서 형질전환 제브라피시 유충을 선택합니다. 전체 유충 해리를 진행하기 전에 0.016% 트리카인을 사용하여 5마리의 dpf 야생형 유충을 마취하고 마취된 유충 30마리를 10x 트립신-EDTA 용액 1밀리리터가 포함된 페트리 접시에 옮깁니다.

그런 다음 면도날을 사용하여 페트리 접시에서 유충을 작은 조각으로 자릅니다. 잘게 썬 유충을 2mL의 10x 트립신-EDTA 용액이 든 마이크로 원심분리기 튜브에 옮기고 튜브를 얼음 위에 3시간 동안 둡니다. 해리를 자극하기 위해 매시간 P1000 피펫으로 내용물을 위아래로 피펫팅합니다.