제브라피시 유충에서 분리된 내장 세포에서 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 수행하려면 야생형 전체 유충 샘플을 사용하여 유세포 분석기에 3, 000개의 세포를 기록하여 분류된 세포 집단의 게이트를 설정합니다. 100미크론 노즐을 사용하고 Sort Precision을 4-Way Purity로 설정합니다. 200 마이크로 리터의 PBS와 5 % 태아 종아리 혈청이 들어있는 수집 튜브를 팩스기에 넣습니다.
분리된 내장에서 준비한 세포 현탁액을 로드하고 죽은 세포에서 이중항을 제외시킨 후 살아있는 세포 또는 DAPI 음성 단일 세포를 수집 튜브에 분류합니다. 세포 분류 후 채취 튜브를 얼음 위에 보관하고 트리판 블루로 생존력 검사를 사용합니다. 혈구계로 현탁액의 세포 수를 계산합니다.
이제 세포는 단일 세포 RNA 염기서열 분석을 위해 처리할 준비가 되었습니다. 대략 20, 표본 당 000의 세포를 이용하십시오.