Microdissection Protocol for Isolating the Murine Left Atrium (LA) with the Pulmonary Veins

먼저, 쥐로부터 분리한 탈수된 심장과 폐를 40-50밀리리터의 PBS가 들어 있는 해부 접시에 넣습니다. 10배 배율의 명시야 현미경 아래에 놓고 조명을 설정합니다. 그런 다음 심장의 등쪽 표면을 해부 접시에 놓습니다.

수술용 가위를 사용하여 심실과 심방벽 사이의 전이를 확인한 후 심방에서 심실을 조심스럽게 분리합니다. 분리된 심방을 심장 베이스가 위를 향하도록 하여 해부 접시에 놓습니다. 심방의 방향은 폐엽이 뒤쪽에 위치하고, 좌심방과 부속지가 오른쪽에 위치하고, 우심방과 부속지가 왼쪽에 위치하도록 합니다.

남은 좌심실 조직을 해부 접시에 고정하여 준비를 고정합니다. 과도한 힘을 가하지 않고 폐 엽을 부드럽게 벌리고 해부 접시에 고정합니다. 다음으로 심장 기저부 중앙에 대동맥궁이 있는 대동맥을 찾습니다.

심장 기저 주변의 결합 조직과 지방 조직을 제거하면서 식별된 모든 랜드마크를 보존합니다. 또한 대동맥궁을 제거하여 심장 기저부의 시야를 확보합니다. 대동맥 바로 오른쪽에 있는 폐동맥 줄기를 감지하고 뒤쪽으로 경로를 추적하여 폐동맥을 식별합니다.

위치를 확인하려면 좌엽과 우측 상엽 또는 중엽까지의 경로를 추적하여 폐 하이럼을 정확히 찾아냅니다. 대동맥 뒤의 왼쪽과 오른쪽 주 기관지의 위치를 결정합니다. 폐 hilum을 향한 경로를 추적하여 위치를 확인합니다.

그런 다음 대동맥 왼쪽에 있는 상대정맥을 확인하고 오른쪽 심방 부속기 근처의 오른쪽 심방으로 가는 경로를 추적합니다. 미세한 집게로 둔하게 절개하여 심방의 윗면에서 폐동맥을 조심스럽게 떼어낸 다음 폐동맥을 절단하고 옆으로 옮겨 좌심방벽과 폐정맥이 완전히 보이도록 합니다. 폐 hilum에서 주요 기관지를 제거하고 기관지 조직을 버립니다.

폐동맥과 주요 기관지의 골격을 확인하기 위해 폐 힐럼을 검사합니다. 심방과 심실을 분리하기 위해서는 남은 우심실의 앞부분을 절개하고 삼첨판막을 통해 대정맥 상부의 앞쪽으로 위쪽으로 이동하여 전두부에서 우심방을 엽니다. 그런 다음 심방 간 중격에 인접한 후방 우심방 자유 벽을 절단하여 우심방과 좌심방 사이에 구분을 만듭니다.

뇌실 중격 옆의 후방 우심실 벽을 잘라 좌심실과 우심실을 완전히 분리합니다. 폐엽의 크기를 줄이기 위해 기저 폐 조직의 일부를 제거하고 폐 조직의 3-4mm만 남깁니다.