환자의 상부 내시경 검사 중에 수집된 위 생검에서 단일 세포의 분리를 시작하려면 먼저 조직이 15밀리리터 원추형 튜브의 바닥에 가라앉도록 합니다. 정해진 후에는 피펫을 사용하여 배지를 흡인하고 항생제가 보충된 PBS 1m리터로 생검을 두 번 세척합니다. 최소 20mg의 조직을 DTT가 보충된 PBS 1mL가 들어 있는 1.5mL의 튜브에 옮깁니다.
미세한 해부 가위를 사용하여 조직을 1-2mm 또는 더 작은 조각으로 자릅니다. 탁상용 미니 원심분리기를 사용하여 15초 동안 튜브 바닥에 있는 조직 조각을 응집한 다음 가능한 한 많은 상층액을 흡입합니다. 50밀리리터의 원뿔형 튜브에 갓 데운 분해 완충액 5밀리리터를 추가합니다.
이 튜브에서 500 마이크로 리터의 완충액을 조직 조각이 들어있는 1.5 밀리리터 튜브로 옮깁니다. 다음으로, 가위를 사용하여 바닥에서 1, 000 마이크로 리터 피펫 팁으로 잘라 팁의 직경을 증가시켜 조직 손실을 최소화합니다. 이제 수정된 피펫 팁을 사용하여 1.5밀리리터 튜브의 작은 조직 조각을 50밀리리터 튜브의 분해 완충액으로 옮깁니다.
분해 완충액과 조직 혼합물을 37도에서 30분 동안 200RPM에서 궤도 진탕으로 배양합니다. 그런 다음 0.25% EDTA가 함유된 따뜻하게 데운 트립신 5mL를 소화 완충액의 조직에 넣고 배양합니다. 동일한 부피의 고급 DMEM/F-12 배지를 추가하여 분해 완충액과 트립신을 중화하고 현탁액을 70미크론 셀 스트레이너에 통과시킵니다.
