시작하려면 얼음에서 해동된 기저막 매트릭스를 제거합니다. 계산된 기저막 매트릭스의 부피를 위 생검 유래 단세포에 첨가하고 약 10초 동안 피펫팅을 위아래로 하여 부드럽게 혼합합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 매트릭스의 50 마이크로 리터 분취액 및 세포 혼합물을 24 웰 조직 배양 플레이트에서 개별 웰의 중심으로 빠르게 옮깁니다.
즉시 접시를 덮고 한 번의 부드러운 동작으로 접시를 거꾸로 뒤집습니다. 거꾸로 된 플레이트를 섭씨 37도의 조직 배양 인큐베이터에 35분 동안 넣어 기저막 매트릭스가 중합되도록 합니다. 그런 다음 500마이크로리터의 예열된 위 오가노이드 배지를 각 웰에 추가하고 각 돔의 상단이 배지에 완전히 잠기도록 합니다.
오가노이드는 일반적으로 단일 세포의 파종 후 10일 이내에 식별할 수 있습니다. 20일째가 되면 크기가 커서 일반적으로 통과해야 합니다. 신체 및 전방 오가노이드의 수는 파종 후 10일째에 최고조에 달했다가 크게 감소하지는 않지만 감소합니다.
맨틀 생검 조직에서 생성된 오가노이드는 신체 생검 조직에서 생성된 오가노이드에 비해 더 빠른 성장률을 보였다. 다양한 환자에 걸쳐, 다양한 오가노이드 형태가 일반적으로 단일 돔에서 관찰되었습니다. 그러나 평균적으로 오가노이드 경직은 거의 변화를 보이지 않았습니다.
