쥐 뇌 균질액을 포함하는 2.125 밀리리터의 폴리프로필렌 튜브에 15 밀리리터의 등장 밀도 구배를 추가하는 것으로 시작합니다. 팩스 버퍼로 각 튜브를 최종 부피 8.5ml까지 채웁니다. 튜브를 부드럽게 뒤집어 20회 완전히 섞습니다.
좁은 눈금이 매겨진 전사 피펫을 사용하여 4mL의 분홍색, 37% 밀도 그라데이션을 부드럽게 밑에 깔아 두 개의 깨끗한 층을 형성합니다. 이송 피펫을 전환하고 37%층 아래의 70% 밀도 구배의 파란색 2밀리리터를 언더레이합니다. 튜브를 섭씨 4도로 냉각된 원심분리기로 옮기고 제동 램프를 가장 낮은 설정으로 설정한 상태에서 500G에서 20분 동안 회전시킵니다.
원심분리 후 깨끗한 전사 피펫을 사용하여 15밀리리터 튜브 상단에서 미엘린을 버립니다. 밀도 구배의 상단 조각을 다른 이송 피펫을 사용하여 깨끗한 15mL 폴리프로필렌 튜브에 조심스럽게 수집합니다. 다음으로, 면역 강화 단편을 수집하면서 튜브의 측면을 따라 피펫을 천천히 돌면서 샘플의 모든 세포를 수집합니다.
면역 강화 단편을 새로운 15mL 폴리프로필렌 튜브로 옮깁니다. 튜브에 팩스 10mL를 추가하여 샘플을 세척합니다. 튜브를 부드럽게 뒤집어 20회 완전히 섞습니다.
제동 램프를 가장 낮은 설정으로 설정하여 분리된 면역 세포를 펠릿화한 상태에서 냉각된 원심분리기에서 튜브를 돌립니다.
