항체 패널을 분석하고 유세포 분석기에 빨간색, 노란색, 파란색 및 보라색을 포함하여 최소 4개의 레이저가 있는지 확인합니다. 보정 비드 또는 단일 염색 세포 대조군을 사용하여 보정 매트릭스를 설정합니다. 보정 및 표준화를 위해 비드 피크가 이전 실험의 목표 값과 정렬될 때까지 광전자 증배관 전압을 조정하여 각 실험을 시작할 때 무지개 형광 비드를 실행합니다.
실험을 위한 광전자 증배관 전압과 이득을 설정합니다. 그런 다음 항체 포획 보상 비드를 사용하여 보상 매트릭스를 설정합니다. 다음으로, 로그의 측면 산란 영역과 선형의 전방 산란 높이를 점도표에서 플로팅하고, 파편을 게이트아웃하고 S1 게이트를 사용하여 셀 크기를 선택하고, S2 게이트를 사용하여 전방 산란 너비 대 전방 산란 높이를 도트 플롯에서 단일 셀을 선택합니다.
플로어 4 게이트를 설정하려면 각 플로어 4 채널에 대해 관련 FMO를 사용하십시오. 단일 파라미터 히스토그램을 사용하여 각 채널의 포지티브 신호를 결정하고 그에 따라 게이트를 설정합니다. 확립된 게이팅 전략을 사용하여 샘플을 주의 깊게 기록합니다.
P2 RY 12 plus 신호를 사용하여 미세아교세포를 식별하고 미세아교세포에 대해서만 각 채널에서 단백질 발현을 측정합니다. 기록 중에 사용된 것과 동일한 게이팅 전략을 복제하여 유세포분석기 분석 소프트웨어 사용자 인터페이스에 분석 게이트를 설정합니다. 통계량 추가 기능을 사용하여 보상된 채널 높이에서 관심 모집단의 중앙값을 선택합니다.
추가 통계 분석을 위해 테이블 편집기를 사용하여 각 채널에 대한 MFI 값을 스프레드시트로 내보냅니다. 지질 다당류 처리는 히스톤 3 라이신 27 아세틸화의 증가를 유도했다. MFI가 성별 내에서 정규화되면 염색된 세포의 히스토그램 분석은 세포가 형광을 증가시키는 정규 분포 집단을 보여주었습니다.
히스톤 3 라이신 27 아세틸화의 유사한 증가가 염색된 세포에서 관찰되었다.
