시작하려면 새끼를 다루는 동안 댐에서 떨어진 별도의 케이지로 강아지를 옮깁니다. 주사 절차를 시작하기 전에 해부 현미경을 사용하여 추간 공간 또는 최소한 강아지의 척추관 정중선을 확인하십시오. 25 또는 10 마이크로 리터 주사기에 약물 제형, 바이러스 준비 또는 인공 척수액 제어 등과 같은 원하는 주사 물질의 10 마이크로 리터를 로드합니다.
동물이 완전히 마취되면 신체 움직임이 감소하거나 없는 것으로 확인된 대로 새끼를 현미경 아래에 부드럽게 배치합니다. 왼쪽 검지와 엄지손가락으로 양측 골반 거들 사이에 위치한 정중선을 따라 추간 공간을 조심스럽게 촉진합니다. 꼬리 밑부분을 약간 돌려 척추의 정중선을 식별할 수 있도록 합니다.
바늘을 조심스럽게 삽입하고 움푹 들어간 부분이 교차하는 지점에서 70도에서 80도 각도로 기울이면서 중앙 시상면과 정렬되도록 합니다. 바늘이 뼈에 닿으면서 서서히 각도를 약 30도로 줄이고 바늘을 추간 공간으로 약 2mm 전진시킵니다. 50-60초 이내에 최대 10마이크로리터의 부피를 천천히 주입합니다.
주사가 완료된 후 10-20초 동안 바늘을 제자리에 두십시오. 누출을 방지하기 위해 바늘을 부드럽게 돌려 빼십시오. 주사 후 강아지를 10-15분 동안 가열 패드에 올려 놓아 강아지가 완전히 회복하고 다시 따뜻해질 수 있도록 합니다.
야생형 신생아에게 빠른 녹색의 척수강내 주사를 투여하자 즉시 투여된 용액이 널리 배포되었습니다. YFP 리포터 마우스는 CRISPR-Cas9 기반 유전자 편집의 척수강내 주사 후 10일 후 뇌 전체에 걸쳐 광범위한 YFP 발현을 보여주었습니다.
