Multiplexed Live-Cell Imaging을 사용하여 환자 유래 오가노이드의 약물 반응을 분석하기 위한 Gen5 소프트웨어의 이미지 분석

먼저 Cytation 5 live cell imaging 시스템을 사용하여 형광 표지된 PDO를 이미지화합니다. 그런 다음 Gen5 소프트웨어를 시작합니다. Experiments(실험)로 이동하고 Task Manager(작업 관리자)에서 Open(열기)을 클릭합니다.

원하는 실험을 열고 Plate를 선택한 다음 도구 모음에서 View를 선택합니다. 그런 다음 데이터 드롭다운 메뉴를 Z 투영으로 전환합니다. 선택한 우물을 두 번 클릭합니다.

분석을 선택합니다. "새 이미지 분석 데이터 축소 단계를 설정하고 싶습니다"를 클릭하고 OK.In 분석 설정을 클릭하고 유형을 셀룰러 분석으로 설정하고 검출 채널을 Z 프로젝션 변환 TSF 명시야로 설정합니다. [옵션]을 클릭하여 기본 마스크 및 개수 페이지를 엽니다.

임계값 상자에서 자동을 선택하고 확인을 클릭하여 팝업 창을 닫습니다. 객체 선택(Object Selection)에서 최소 및 최대 객체 크기를 정의하여 세포 파편 또는 단일 세포를 필터링하고 원하는 대로 다른 피처를 선택합니다. 그런 다음 적용을 클릭하면 마스킹된 개체가 강조 표시됩니다.

세포 분석 도구 모음에서 하위 모집단 분석을 설정하려면 Calculated Metrics(계산된 메트릭)를 클릭합니다. 그런 다음 오른쪽 하단 모서리에서 관심 있는 개체 수준 메트릭 선택 또는 만들기를 클릭합니다. Available object metrics(사용 가능한 객체 메트릭)에서 원하는 메트릭(예: Circularity)을 선택하고 Insert(삽입)를 클릭합니다.

딸깍 하는 소리 OK 확인. 그런 다음 세포 분석 도구 모음에서 Subpopulation Analysis(하위 모집단 분석)를 선택하고 Add(추가)를 클릭하여 새 하위 모집단을 만듭니다. 하위 모집단의 이름을 입력합니다.

개체 메트릭에서 Add Condition(조건 추가)을 클릭하여 선택한 메트릭을 추가합니다. Edit Condition(조건 편집) 창에서 원하는 매개변수를 입력하고 OK(확인)를 클릭합니다. 창 하단의 표에서 원하는 결과를 선택하고 OK(확인)를 클릭한 다음 Apply(적용)를 클릭합니다. Object Details(개체 세부 정보)에서 마스킹을 볼 지정된 하위 모집단을 선택합니다.

만족스러우면 Cellular Analysis(세포 분석) 창에서 OK(확인)를 클릭하고 Add Step(단계 추가)을 클릭하여 분석을 모든 웰에 적용합니다.