시작하려면 발효된 포도 샘플 20mL를 멸균된 50mL 스크류 캡 튜브에 옮깁니다. 그런 다음 균질화를 위해 튜브와 소용돌이에 10ml의 찬물을 추가합니다. 샘플을 섭씨 4도에서 1분 동안 800G로 원심분리합니다.
상층액을 새 50밀리리터 튜브로 옮기고 섭씨 4도에서 20분 동안 3000G의 원심분리기를 사용합니다. 상층액을 버린 후 펠릿을 PBS 1밀리리터에 재현탁시킵니다. 세포 현탁액을 2 밀리리터 나사 모자 관 및 14에 분리기에 옮기십시오, 2 분 동안 000 G.
이제 pH 7.4의 인산나트륨 완충액 978마이크로리터와 DNA 완충액 122마이크로리터에 펠릿을 재현탁시킵니다. 튜브를 소용돌이치게 하고 섭씨 4도에서 45분에서 1시간 동안 둡니다. 샘플 1mL를 용해 용액 튜브 1개에 옮기고 캡을 조입니다.
비드 비팅 그라인더에서 각각 60초 동안 샘플을 세 번 균질화합니다. 그런 다음 16, 800 G.Transfer에서 1 분 동안 용해 매트릭스 E 튜브를 원심 분리하고 250 마이크로 리터의 단백질 침전 용액을 튜브에 추가합니다. 튜브를 10번 흔들어 내용물을 섞습니다.
샘플을 16, 800G에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 멸균된 15밀리리터 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 1 밀리리터의 결합 매트릭스 현탁액을 상층액에 넣고 2 분 동안 튜브를 뒤집어 혼합한 후 3 분 동안 랙에 넣습니다. 상층액 1밀리리터를 제거한 후 나머지 상층액에 매트릭스를 재현탁시킵니다.
혼합물 600마이크로리터를 스핀 필터 튜브와 원심분리기로 옮깁니다. 그런 다음 흐름을 디캔팅하고 500마이크로리터의 세척 용액을 스핀 필터 튜브에 추가합니다. 탈수 필터를 제거하고 새 캐치 튜브에 5분 동안 넣습니다.
건조 후 필터 멤브레인에 50마이크로리터의 따뜻한 DNAse가 없는 물을 넣고 피펫 팁으로 매트릭스를 부드럽게 저어줍니다. 14, 500 G에서 1 분 동안 원심 분리하여 DNA를 용리시킵니다. 시료를 아가로스 겔에 로드합니다.
마지막으로 DNA 농도를 측정합니다.
