Registration of the Fluorescence Microscopy Image with the Electron Microscopy Image for Correlative Light and Electron Microscopy

시작하려면 등록 소프트웨어를 열고 EasyCLIMv0을 검색하십시오. 찾으면 EasyCLIMv0을 클릭하고 이미지 또는 시퀀스를 클릭한 다음 열기를 선택하여 전자현미경 이미지와 명시야 및 형광 이미지의 합성 이미지를 가져옵니다. EasyCLIMv0 인터페이스에서 2D XYT를 클릭하여 비강성 2D 또는 3D를 정렬 모드로 선택합니다.

EasyCLIMv0 창에서 변환 및 크기 조정될 선택 이미지(예: FM)의 오른쪽에 있는 드롭다운 상자를 클릭하여 합성 RGB 색상 tiff를 선택한 다음 수정되지 않을 선택 이미지(예: EM)의 오른쪽에 있는 드롭다운 상자를 클릭하여 6개의 이미지 tiff를 선택합니다. Start(시작)를 클릭하여 등록 프로세스를 시작합니다. 전자 현미경 이미지 창 6 개의 이미지 tiff에서 금 나노 입자를 클릭하여 0.1을 배치합니다.

형광 현미경 이미지 창에서 RGB 컬러 tiff를 합성합니다. 해당 금 나노 입자를 클릭하여 0.1을 넣습니다. 그런 다음 Update Transformation을 클릭하여 금 나노 입자의 형광 및 전자 현미경 신호의 정렬을 확인하고 Stop을 클릭하여 정합을 완료합니다.

4개의 채널 이미지가 포함된 정렬된 이미지 스택을 내보내려면 오버레이된 이미지를 클릭하고 이미지 또는 시퀀스를 선택한 다음 다른 이름으로 저장을 클릭합니다.이제 ImageJ를 열고 파일을 클릭한 다음 열기를 선택하여 오버레이 이미지를 가져옵니다. Image(이미지)로 이동하여 Stacks(스택)를 클릭한 다음 두 개의 이미지를 스택하여 4개의 채널 이미지로 분리합니다. 그런 다음 이미지를 선택하고 색상을 클릭한 다음 채널 병합을 클릭하여 세 개의 채널을 합성 이미지로 병합합니다.

합성 이미지를 상관 광 및 전자 현미경 이미지로 변환하려면 [이미지]를 선택한 다음 [유형]을 선택하고 [RGB 색상]을 클릭합니다.