Viral Infection of Human Intestinal Organoid Monolayers for Live Fluorescence Imaging

바이러스 접종물을 준비하는 것부터 시작합니다. 로타바이러스 스톡을 활성화하기 위해 마이크로리터당 10마이크로그램의 워딩턴 트립신을 첨가하고 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 50 마이크로 리터의 활성 바이러스 스톡을 50 마이크로 리터의 CMGF-Next로 희석하고 HIO 단층의 배지를 100 마이크로 리터의 바이러스 접종물로 교체하여 단층을 감염시킵니다.

로타바이러스 감염의 경우 25게이지 바늘을 사용하여 단층 길이에 걸쳐 단일 점수를 만듭니다. 접시를 섭씨 37도에서 2시간 동안 배양합니다. 배양 후 접종물을 제거하고 1 X PBS로 단층을 한 번 세척합니다.

그런 다음 100 마이크로 리터의 페놀 무 적색 분화 배지를 첨가하십시오. 이미징할 준비가 될 때까지 슬라이드를 섭씨 37도 인큐베이터에 놓습니다.