먼저 PDMS 마이크로웰 몰드, 부착 방지 헹굼 용액 및 필요한 실험실 착용을 조직 배양 후드에 넣습니다. PDMS 마이크로웰 형을 세척하기 위하여는, 1개, 000 마이크로리터 각 우물에 반대로 부착 헹구는 해결책의 300 마이크로리터를 추가하기 위하여 피펫을 이용하십시오. 그런 다음 플레이트 1, 620G을 3분 동안 원심분리합니다.
진공 펌프와 파스퇴르 피펫을 사용하여 용액을 흡입합니다. 다음으로, 500 마이크로 리터의 셀 현탁액을 마이크로 웰에 원하는 농도로 놓고 플레이트를 1, 620G에서 3 분 동안 원심 분리합니다. 스페로이드가 형성될 수 있도록 가습 인큐베이터에 플레이트를 놓습니다.
스페로이드를 수확하려면 1, 000 마이크로 리터 피펫을 사용하여 각 우물에 500 마이크로 리터의 완전한 배지를 단단히 추가하십시오. 첨가된 배지를 각 사분면에서 위아래로 3-4회 피펫팅하여 스페로이드를 제거합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 스페로이드가 포함된 배지를 마이크로 원심분리기 튜브로 부드럽게 흡입합니다.
스테로이드 현탁액 50 마이크로 리터를 마이크로 원심 분리기 튜브에 옮깁니다. 그런 다음 순차적으로 4-Arm PEG 아크릴레이트와 PEG 디티올을 추가합니다. 생성된 용액을 약 10회 위아래로 피펫팅하여 혼합합니다.
10% 중량의 100 마이크로리터 PEG 하이드로겔 전구체 용액을 수득하기 위해 1mm 실리콘 스페이서로 분리된 두 개의 파라필름 라이닝 유리 슬라이드 사이에 겔 전구체 용액 20 마이크로리터를 피펫팅하고 겔화를 허용하기 위해 겔 전구체 용액으로 슬라이드를 배양합니다. 하이드로겔 겔화가 완료되면 주걱을 사용하여 분리된 유리 슬라이드에서 겔을 부드럽게 떼어냅니다. 웰당 하나의 젤을 24웰 플레이트에 넣고 스페로이드가 포함된 표면이 위를 향하도록 합니다.
하이드로겔을 완전히 담그기 위해 각 웰에 500마이크로리터의 완전한 배지를 추가합니다. 멀티웰 플레이트를 가습 인큐베이터에 넣어 세포를 배양합니다. 마이크로웰 몰드를 사용한 기술된 기술은 구형과 엄격하게 제어된 다분산성을 갖는 스페로이드의 형성을 초래했습니다.
마이크로웰 당 3, 300개의 세포를 가진 회전 타원체의 경우, 평균 회전 타원체 크기는 약 250미크론이었고 원형도는 0.8보다 컸으며, 1의 값을 완벽한 구로 간주했습니다. 스페로이드 직경은 마이크로웰 크기와 마이크로웰당 셀 수에 따라 달라졌습니다.
