형질주입을 위한 마우스 만능줄기세포(mPSC) 준비

젤라틴 코팅 된 24 웰 플레이트를 준비하려면 각 웰에 200 % 젤라틴 용액 0.2 마이크로 리터를 첨가하십시오. 접시를 부드럽게 흔들어 용액을 고르게 퍼뜨리고 웰이 실온에서 코팅되도록 합니다. 15분 후 진공 흡입기를 사용하여 우물에서 남은 젤라틴을 조심스럽게 제거합니다.

각 웰에 갓 준비한 NBIL 배지 0.5ml를 추가합니다. 그리고 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에 넣어 예열합니다. 30밀리리터의 세척 매체를 50밀리리터 원뿔형 튜브에 분취합니다.

mESC의 조직 배양 접시에서 배지를 흡인하고 필요한 양의 세포 분리 배지를 추가합니다. 3-5분 후, P1, 000 피펫을 사용하여 15-20회 위아래로 피펫팅합니다. 현미경으로 세포를 관찰하십시오.

단일 셀 현탁액을 보장하려면 셀 현탁액을 세척 매체가 들어 있는 50mL 튜브로 옮깁니다. 실온에서 300G에서 5분 동안 현탁액을 원심분리하고 세척제를 흡입합니다. 펠릿을 약 300마이크로리터의 세척 매체에 재현탁시킵니다.