마우스 만능 줄기 세포(mPSC)의 역방향 및 순방향 형질주입

시작하려면 200마이크로리터의 NBIL 배지를 1.5밀리리터 튜브에 분취합니다. 26 마이크로리터의 최적 transfection 시약 혼합물을 DNA 최적 혼합물에 첨가합니다. 시약에 약 10회 세게 배관합니다.

필요한 부피의 mPSC 현탁액을 200마이크로리터의 NBIL 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 lipofectamine 2000과 DNA 혼합물을 튜브에 넣고 피펫팅으로 잘 혼합합니다. 5분 후 혼합물을 300G에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거하고 튜브에 약 50마이크로리터를 남깁니다.

펠릿을 100마이크로리터의 NBIL 매체에 다시 현탁시킵니다. 세포 현탁액을 젤라틴으로 코팅된 24웰 플레이트로 옮기고 플레이트를 인큐베이터에 놓습니다. mPSC 현탁액의 필수 부피를 씨를 뿌리기 위하여 25, 젤라틴에 의하여 입힌 24 우물 격판덮개의 우물 당 000의 세포를 옮기고 인큐베이터에 있는 격판덮개를 두십시오.

형질주입 1시간 전. 우물의 배지를 0.5ml의 NBIL 배지로 교체합니다. 배양 후, 적가, lipofectamine 2000 및 DNA 혼합물을 우물에 첨가하십시오.

플레이트를 인큐베이터에 48시간 동안 넣습니다.