신경혈관 모델링을 위한 병아리 배아 맥락막의 인간 뇌 오가노이드 이식

먼저 H9 배아 줄기 세포에서 뇌 오가노이드를 추출하고 새로 수정된 닭 알을 얻습니다. 첫날에는 달걀 껍질 표면을 70% 에탄올로 청소하고 건조시킵니다. 달걀 위에 수술용 종이 접착 붕대를 놓습니다.

램프를 사용하여 상단 끝의 가장 얇은 달걀 껍질 표면을 분해합니다. 그런 다음 멸균 바늘로 달걀 껍질에 부드럽게 구멍을 뚫어 병아리 캠을 방해하지 않고 공기 챔버 구멍을 만듭니다. 외부 환경으로부터 배아를 보호하려면 공기 챔버 구멍을 새 붕대로 덮고 섭씨 38도에서 난자를 부화시킵니다.

7일째 되는 날, 붕대를 제거하고 달걀 껍질 표면을 70% 에탄올로 닦습니다. 그런 다음 연장부를 덮고 있는 더 큰 새 붕대를 놓습니다. 달걀 껍질에 부드럽게 구멍을 뚫어 구멍을 직경 2cm의 접목 창으로 확대합니다.

핀셋을 사용하여 달걀 껍질 창의 가장자리를 제거하고 붕대를 벗겨 남은 먼지와 달걀 껍질 조각을 제거합니다. 멸균 와이드 게이지 팁을 사용하여 50마이크로리터의 PBS에 오가노이드를 수집하고 배아 위치 반대쪽 캠으로 조심스럽게 옮깁니다. 오가노이드 주위에 7마이크로리터 방울의 성냥 젤을 추가합니다.

파라필름을 사용하여 창을 밀봉하고 접착 붕대로 쉘에 부착합니다. 캠 분화를 위해 이식을 배양합니다. 5일 후 접착 붕대를 제거합니다.

가위와 미세한 핀셋을 사용하여 샘플 채취를 용이하게 하기 위해 창을 확대합니다. 4% 파라포름알데히드로 2분 동안 고정하고 오가노이드가 포함된 캠의 1.5제곱센티미터 부분을 수집합니다. 성공적인 이식을 확인하려면 오가노이드를 사용하여 20마이크로미터 두께의 캠 조직 절편에 대한 헤마톡실린 및 에오신 염색을 수행합니다.

이식편 조직의 헤마톡실린(Hematoxilin) 및 에오신 염색(eosin staining)은 혈관 침윤의 증거 없이 오가노이드가 캠 혈관 옆에서 계속 성숙함을 나타냈습니다.