유출 결핍 박테리아 균주에서 단일 복제 유전자 발현을 달성하기 위한 전기 능력 세포의 준비

먼저 모든 멸균 1.5밀리리터 마이크로퓨지 튜브와 멸균 전기천공법 큐벳을 얼음 위에 놓습니다. 그런 다음 섭씨 4도에서 보관된 멸균수 병을 얼음 위에 놓습니다. 하룻밤 세균성 문화의 1.5 밀리리터를 1.5 밀리리터 microfuge 관의 한으로 옮기고 13에 의 2 분 동안 000 G를 분리하기 위하여 세포를 펠릿으로 만든다.

1밀리리터 피펫을 사용하여 세포 펠릿을 방해하지 않고 모든 상층액을 제거합니다. 동일한 microfuge 관, 13에 분리기로 세균성 문화의 또 다른 1.5 밀리리터를 추가하십시오, 2 분 동안 000 G 및 상층액을 제거하십시오. 1m리터의 얼음처럼 차갑고 멸균된 물을 세포 펠릿에 추가하고 펠릿이 더 이상 마이크로퓨지 튜브 바닥에 놓이지 않을 때까지 부드러운 피펫팅으로 다시 부유시킵니다.

2 분 동안 13, 000 G에 다시 중단한 세포를 분리하고, 1 밀리리터 피펫을 사용하여 주의깊게 상층액을 제거한다. 최종 세포 펠릿을 200 마이크로리터의 얼음처럼 차가운 멸균수에 부드럽게 다시 현탁시키고 100 마이크로리터의 최종 세포 현탁액을 두 번째 얼음처럼 차가운 1.5 밀리리터 미세분리 튜브로 옮깁니다.